Purificación y propiedades de una a-galactosidasa termoestable de Lenzites elegans

SAMPIETRO, D. A.; SGARIGLIA, M.A.; SOBERÓN, J.R.; VATTUONE, M.A.

Tafí del Valle

Congreso; XXVIII Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2011

Asociación de Biología de Tucumán

Introduccion: La podredumbre blanca de los hongos es importante en los ecosistemas forestales por su capacidad de degradar componentes de la madera (celulosa, hemicelulosas y Iignina) Los principales constituyentes de las hemicelulosas son hetero-1,4-b-D-xilanos , hetero-1,4-b-D-mananos, galactoglucomananos y glucomananos . Objetivos: Purificacion , determinacion de las propiedades fisicoquimicas, cineticas y analisis de la resistencia a temperaturas y pHs extremos de una a-galactosidasa de L. elegans. Materiales y rnetodos: Se utilizo Lenzites elegans aislado de madera en decaimiento. La enzima se aislo del filtrado del medio de cultivo. Se la purifico hasta hornogeneidad electroforetica can sulfato de amonio, filtracion por gel y cromatografia de intercambio anionico. Resultados y discusion: La Mr de la enzima fue 158 kDa, determinada por filtracion por gel. Es un homodimero (Mr subunidad = 61 kDa). Su temperatura optima de accion fue en el rango de 60-80 C. La a-galactosidasa tiene alta termoestabilidad ; retiene el 94 % de su actividad luego de preincubacion a 60 °C durante 2 h. EI pH optimo de la enzima fue 4,5 y es estable desde pH 3 a 7,5 cuando la preincubacion tuvo lugar a 60 °C durante 2 h. Fue activa sobre agalactosidos: p-nitrofenil-a-D-galactopiranosido, a-D-melibiosa, rafinosa y estaquiosa. La a-galactosidasa es una glicoproteifna con 26 % de azucares estructurales. La galactosa es un inhibidor no-competitivo (Ki = 22 mM vs. p-nitrofenil-a-D-galact6sido y 12 mM VS. a-D-melibiosa como sustratos). GJucosa un inhibidor competitivo ( Ki = 10 mM). Los cationes Hg2+, Ag1+Yp-c1oromercuribenzoato fueron inhibidores, sugiriendo la presencia de grupos -SH en el centro activo de la enzima. Sobe la base de la secuencia N-terminal de la enzima (SPDTIVLDGTNFALN) la a-galactosidasa fue clasificada como miembro de la familia 36 de glicohidrolasas (GH 36). Conclusiones: Las propiedades de la a-galactosidasa de L. elegans sugieren el uso de este hongo como fuente para la produccion de a-galactosidasa para aplicaciones industriales.