Trazabilidad de dos cepas PGPR en plantines de yerba mate inoculados bajo condiciones de vivero.

CORTESE ILIANA JULIETA; BOYCHO, MARISA ESTHER; ONETTO, ANDREA LILIANA; SCHEGG, ESTEBAN; ZAPATA, PEDRO DARIO; CASTRILLO, MARIA LORENA; LACZESKI, MARGARITA ESTHER

La Plata

Congreso; Congreso Nacional de Ecología y Biología del Suelo VII; 2022

IntroducciónLa yerba mate (Ilex paraguariensis St. Hil.), es un árbol perennifolio perteneciente a la familia Aquifoliaceae. Las características y condiciones agroecológicas aptas para su cultivo se encuentran en el sur de Brasil, Paraguay y noreste de Argentina, principalmente en las provincias de Misiones y Corrientes donde comprende el 87% y 13% de la superficie cultivada, respectivamente (INYM, 2021). Después de algunos años de producción agrícola, la fertilidad y el contenido de nutrientes, disminuye sustancialmente (Capellari y col., 2017). Estos antecedentes orientan la investigación de nuevas tecnologías para la producción sustentable de yerba mate (Laczeski y col., 2020). Las rizobacterias promotoras del crecimiento vegetal (PGPR, por sus siglas en inglés) son un grupo de bacterias que se encuentran en la rizósfera o como endófitos donde establecen una interacción íntima y proporcionan efectos benéficos sobre el crecimiento y desarrollo de las plantas.La colonización radicular de las PGPR comprende el crecimiento activo de las bacterias introducidas en el suelo o tejido vegetal (Mendis, 2018). La capacidad de supervivencia de las PGPR está influenciada por la abundancia y la composición de la microbiota indígena (Strigul y Kravchenko, 2006), como así también por propiedades químicas y físicas del suelo como ser contenido de materia orgánica y pH (Anriquez y col., 2019).En la última década la implementación de métodos basados en el análisis de ácidos nucleicos ha aportado información relevante sobre las interacciones entre microorganismos-suelo-planta (Menéndez et al., 2020). La secuenciación de genomas completos permite el estudio en profundidad de cepas bacterianas a partir de la detección de secuencias únicas que pueden ser utilizadas, por ejemplo, para el diseño de marcadores moleculares cepa-específicos. En estudios previos, el grupo de trabajo estudió dos cepas de Bacillus altitudinis aisladas de plantines de I. paraguariensis St. Hil. (yerba mate) en la provincia de Misiones. Ambas cepas presentaron propiedades para estimular el crecimiento vegetal in vitro (Laczeski y col., 2020), en vivero y en plantaciones adultas de yerba mate. En base a los planteado anteriormente el objetivo del presente trabajo fue realizar estudios de trazabilidad de las cepas bacterianas B. altitudinis T5S-T4 y B. altitudinis 19RS3, en el suelo de plantines de I. paraguariensis St. Hil. inoculados en condiciones de vivero.Materiales y MétodosSe trabajó con plantines de yerba mate (I. paraguariensis St. Hil) de 6 meses de edad con buen estado fitosanitario. El ensayo se llevó a cabo en el vivero de la Fundación Alberto Roth (Santo Pipó, Misiones).Para el ensayo se realizaron tres tratamientos que consistieron en inoculaciones con B. altitudinis T5S-T4, B. altitudinis 19RS3, y la combinación de ambas cepas (B. altitudinis T5S-T4 + B. altitudinis 19RS3). Se trabajó con 50 plantines por tratamiento.Se inoculó cada plantín por la técnica de riego directo, con 5 ml de una suspensión bacteriana con una concentración 1,5 108 UFC mL-1. Se regó el sustrato lentamente para permitir la absorción y la distribución homogénea del inóculo. Como control negativo se utilizaron plantines regados con agua corriente. Se realizaron 3 inoculaciones cada 15 días. El ensayo se mantuvo por 60 días, durante los cuales se tomaron muestras de suelo semanalmente y se conservaron en bolsas herméticas a -80 °C hasta su utilización.Para la detección molecular de B. altitudinis T5S-T4 y B. altitudinis 19RS3, se realizó la extracción de ADN de suelo utilizando el kit comercial DNeasy PowerSoil, MoBio (TecnoLab, Argentina). Se realizó la amplificación por PCR convencional con los cebadores cepa-específicos 3296-F 3´-gCTACATATCCAACTCCTCAgA-5´ y 3296-R 3´- AgCAATAgTAACCgACTTCTCAg-5´ y 884-F 3´-ggTCAgCCTgTAAAAACACCg-5´ y 884-R 3´-gTCCCATCCATTAACCTTCA5´ diseñados para B. altitudinis T5S-T4 y B. altitudinis 19RS3, respectivamente.ResultadosSe corroboró la presencia de las cepas B. altitudinis T5S-T4 y B. altitudinis 19RS3 en el suelo de plantines de yerba mate inoculados bajo condiciones de vivero. La cepa B. altitudinis T5S-T4 se detectó desde el día 7 a partir de su primera inoculación, mientras que la cepa B. altitudinis 19RS3 se detectó a partir del día 21. Ambas cepas se mantuvieron hasta el final del ensayo, tanto en los tratamientos individuales como en los combinados. En la Figura 1 y Figura 2 se pueden observar los productos obtenidos a partir de la amplificación realizada con los cebadores cepa específicos diseñados para B. altitudinis T5S-T4 y B. altitudinis 19RS3, respectivamente.Estos resultados permiten inferir que las cepas en estudio colonizan y persisten en el suelo de plantines inoculados bajo condiciones de vivero, ejerciendo su efecto promotor de crecimiento vegetal.Institución financiadoraEl presente trabajo fue financiado por el INYM a través del proyecto PRASY: ?Biofertilizante: validación a campo y estudios de trazabilidad de la utilización de Bacillus sp. como fertilizante para yerba mate? Res. nº 274/17 (INYM - PRASY). Los plantines de yerba mate fueron generosamente cedidos por la Fundación Alberto Roth (Santo Pipó, Misiones, Argentina).