Desarrollo de un sistema de detección molecular POCT para Neisseria gonorrhoeae

MARCHESANO LUCAS; PRESTI, DAMIÁN; BORIO CRISTINA; BILEN MARCOS

Buenos Aires

Congreso; SADI 2023; 2023

Sociedad Argentina de Infectología

Neisseria gonorrhoeae (NG) es el agente etiológico de la gonorrea, una de las cuatro enfermedades de transmisión sexual (ETS) curables más prevalentes a nivel mundial. Las metodologías de diagnóstico mayormente utilizadas en Argentina se basan en el cultivo del microorganismo, en la determinación sindrómica o en PCR. Las metodologías de detección molecular basadas en PCR son las herramientas más eficientes debido a su sensibilidad, rapidez y especificidad. Sin embargo, es una técnica costosa y difícil de realizar en todos los centros de salud debido a la necesidad de laboratorios y equipamientos costosos. En este sentido, los desarrollos de pruebas rápidas y asequibles que permiten dar un diagnóstico inmediato en centros de baja complejidad, disminuyendo costos y agilizando el análisis, son importantes para el sistema de salud como complemento de las metodologías actuales. El objetivo de este trabajo es el desarrollo de un kit de detección molecular POCT (point of care testing) para NG. Para esto, se diseño un sistema de detección molecular basado en la plataforma de amplificación isotérmica de ácido nucleicos ELA (Easy Loop Amplification). Para disminuir las etapas de revelado acoplamos una reacción colorimétrica al producto de reacción, que permite determinar al ojo desnudo el resultado del análisis. Por último, para proporcionar objetividad a los resultados indeterminados se construyó un dispositivo fotónico portátil capaz de interpretar cuantitativamente los resultados.Los resultados obtenidos, sobre un panel de 7 muestras de referencia conteniendo otras especies de Neisserias y bacterias comensales mostraron un 100% de especificidad. El análisis in silico utilizando toda la base de datos genómica de bacterias mostró un 100% de especificidad. Por otro lado, a partir del análisis de un panel de 22 muestras clínicas se obtuvo un 91% de correlación respecto a la metodología de referencia. Los dos resultados discordantes fueron falsos negativos. Si bien los resultados presentados son preliminares, podemos evidenciar una excelente performance del sistema, comparable a la qPCR. Por otro lado, el sistema presenta ventajas respecto a su simplicidad, dado que se requiere una temperatura constante de incubación, y es posible evaluar el resultado a simple vista, prescindiendo de equipos sofisticados. Todos los resultados obtenidos se obtuvieron dentro de los 35 minutos de reacción acelerando el tiempo del análisis respecto a una PCR.