LOS NEUTRÓFILOS HUMANOS LIBERAN VESÍCULAS EXTRACELULARES EN RESPUESTA A LA TOXINA SHIGA 2

SHIROMIZU, CAROLINA MAIUMI; KEITELMAN, IRENE ANGÉLICA; GOMEZ FERNANDO DANIEL; VEREERTBRUGGHEN A.; VERA AGUILAR D.; PEREZ P. S. ; ROSATO, MICAELA; RAMOS M. V.; CAROLINA JANCIC; FUENTES F.; GALLETTI J.; AMARAL MARÍA MARTA; PALERMO MARINA; SABBIONI F.; TREVANNI ALICIA.

Buenos Aires

Simposio; Simposio sobre Escherichia coli productor de toxina Shiga responsable del Síndrome Urémico Hemolítico denominado VTEC Argentina 2022; 2022

VTEC Argentina

La bacteria Escherichia coli productora de toxina Shiga (Stx)(STEC) es un patógeno entérico no invasivo que coloniza elintestino, donde libera la Stx que se transloca a circulación y puede producir Síndrome Urémico Hemolítico (SUH). Los neutrófilos (PMN) son reclutados al intestino tras la infección por STEC, siendo la neutrofilia un evento típico en el SUH y factor demal pronóstico. Estudios previos sugieren que la Stx podría ser transportada hasta órganos blanco como el riñón en vesículasextracelulares (VE) generadas por las células del sistema inmune. El objetivo de este trabajo fue determinar si los PMN producenVE en respuesta a la Stx2 (VE-Stx), si las mismas contienen la Stx y su impacto sobre la viabilidad y la capacidad de producir citoquinas por células del endotelio glomerular humano (HGEC). Para ello, aislamos PMN humanos de sangre periférica de dadoressanos por gradiente de Ficoll-Triyosom, sedimentación en Dextrán y lisis hipotónica. Además, cultivamos HGEC obtenidas bajoconsentimiento informado, de pacientes pediátricos sometidos a nefrectomías realizadas por uropatías segmentarias o tumoren uno de los polos. Los PMN fueron incubados con 100 ng/ml Stx2 purificada (Tuffs Medical Center), Stx2 inactivada por calor(Stx Ø) o vehículo (C) por 4 h para luego aislar las VE generadas mediante centrifugación diferencial. Mediante microscopíaconfocal (n=4) y a través de la detección del marcador CD63 por Western Blot (n=6), comprobamos que los PMN producen VEtanto en la condición control como en respuesta a la Stx2. Mediante un ensayo de viabilidad empleando la línea celular VEROsensible a la acción tóxica de la Stx, comprobamos que las VE-Stx transportan Stx2 ya que disminuyeron significativamentela viabilidad de dichas células en comparación con las VE-StxØ y VE-C (n=10; p