Microscopía de fluorescencia para el estudio de condensados biomoleculares en células vivas

BELÉN BENÍTEZ; MARTÍN STORTZ; ADALI PECCI; DIEGO M. PRESMAN; VALERIA LEVI

Cuidad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; V Jornadas de Jóvenes BionanoCientíficos (JoBion); 2023

Facultad de Ciencias Exactas y Naturales- Universidad de Buenos Aires

El núcleo celular está organizado en una variedad de compartimentos sin membrana queconcentran ciertas biomoléculas con funciones específicas, incluidas las involucradas en laregulación transcripcional. Se ha propuesto que muchos de estos compartimentos se formanmediante un proceso de separación de fases líquido-líquido (LLPS). Durante varios años, nuestrogrupo ha visualizado y analizado cuantitativamente la organización dinámica de ciertos factores detranscripción (TFs) en células vivas. El receptor de glucocorticoides (GR), un TF activable por ligando,se particiona entre el nucleoplasma y múltiples focos (foci) nucleares discretos. En este contexto,nuestro grupo ha descripto que los foci de GR presentan propiedades compatibles con loscondensados formados por LLPS en células vivas. Sin embargo, el papel biológico de estasestructuras aún no está claro. Aquí, exploramos si los condensados de GR intranucleares tienen unpapel en la actividad transcripcional. Mediante el uso de técnicas avanzadas de microscopía defluorescencia en células vivas, caracterizamos el comportamiento de los focos GR y otras proteínasimplicadas en la respuesta transcripcional. En particular, utilizamos microscopia de AiryScan,Número y Brillo, FRAP, FCS, FCCS, entre otros.. De manera consistente con un papel positivo en latranscripción, los focos GR se redistribuyen y colocalizan con una subunidad del complejo Mediador(Med1), un actor clave en la transcripción de RNApol II. Curiosamente, observamos al menos dossubpoblaciones de condensados de GR que difieren en su tamaño, intensidad relativa y respondende manera diferente a la sobreexpresión de Med1. También observamos una anticorrelación entrela formación de focos y la condensación local de cromatina en la que los focos GR están excluidosde las regiones de heterocromatina. Finalmente, mostramos que la inhibición farmacológica delalargamiento de RNApol II conduce a una disminución en la densidad de los focos, al tiempo queaumenta su intensidad y tamaño relativos. En conjunto, nuestros resultados sugieren que al menosuna subpoblación de condensados de GR está involucrada en la actividad transcripcional de GRmediante el reclutamiento de proteínas relacionadas con este proceso. Una mayor exploración deesta nueva capa de regulación transcripcional podría abrir nuevas vías para el control farmacológicode la acción de los GR.