Detección de ADN ambiental como herramienta para el monitoreo de Lithobates catesbeianus

OLIVERAS A; CÓCERES A; POZZI AG; JUNGBLUT LD

Buenos Aires

Congreso; XXIII Congreso Argentino de Herpetología; 2023

Asociación Herpetológica Argentina

La detección de ADN ambiental es una herramienta desarrollada en los últimos años que ha demostrado ser útil para el monitoreo de especies invasoras y su detección temprana en el ambiente. Este trabajo aborda los primeros pasos para la implementación de esta metodología en la detección de la especie invasora Lithobates catesbeianus en ambientes naturales de nuestro país. En particular, evaluamos la especificidad de 2 sets de primers, cuyo tamaño de amplicon es: 79pb y 210pb, respectivamente, diseñados por otros autores para secuencias del gen Cytb de L. catesbeianus y utilizados para la detección de esta especie en Europa. Extrajimos ADN a partir de muestras de tejido de L. catesbeianus y Rhinella arenarum que se utilizó como templado para estandarizar las condiciones de PCR, variando el número de ciclos y temperatura de hibridación. Para el set de primers de 210pb logramos estandarizar las condiciones de especificidad de amplificación (detección positiva para L. catesbeianus y negativa para R. arenarum). Para el set de primers de 79pb no logramos condiciones de especificidad; coincidiendo con los análisis in silico realizados a partir de secuencias publicadas en GenBank, donde observamos que estos primers presentan alta homología con las secuencias conocidas de especies locales. Utilizamos el set de primers de 210pb en pruebas de sensibilidad de la técnica, filtrando (con copas y filtros de 0.45 um estériles) 50 ml de agua de un tanque seminatural en el que criamos ejemplares juveniles de L. catesbeianus. Extrajimos ADN de estos filtros y amplificamos por PCR, obteniendo una correcta amplificación de ADN de estas muestras. Esto demuestra la viabilidad de la medición de ADN ambiental como herramienta para su potencial utilización en el monitoreo de esta especie invasora, lo que mejoraría las capacidades para una detección temprana en el ambiente con un menor esfuerzo de muestreo.