ROL DEL MRP4 EN LA REGULACIÓN DE LA VÍA DE FOSFORILACIÓN DEPENDIENTE DE AMPc DURANTE LA CAPACITACIÓN EN ESPERMATOZOIDES HUMANOS

SOFÍA MARIA RIO; CAMILA ARROYO SALVO; ALONSO, CARLOS AGUSTÍN ALONSO; BOGETTI MARIA EUGENIA

Jornada; XXIV Jornadas Anuales de la Sociedad Argentina de Biología; 2022

ROL DEL MRP4 EN LA REGULACIÓN DE LA VÍA DE FOSFORILACIÓN DEPENDIENTE DE AMPc DURANTE LA CAPACITACIÓN EN ESPERMATOZOIDES HUMANOSRío S1, Arroyo-Salvo C1, Alonso C A I2, Bogetti M E1, Morales M F3, Gabriela Arenas3, Gastón Rey-Valzacchi3, Carlos Davio, Pérez-Martínez S1. 1Laboratorio de la Reproducción en Mamíferos, CEFYBO-UBA, Buenos Aires, Argentina; 2Department of Pharmacology and Therapeutics, McGill University, Montreal, Canada; 3Red de Medicina Reproductiva y Molecular (PROCREARTE), Buenos Aires, Argentina. E-mail: perezms@fmed.uba.arPreviamente demostramos la importancia de la proteína de resistencia a múltiples drogas 4 (MRP4) en espermatozoides bovinos y murinos. Esta proteína transportadora participa en el proceso de capacitación espermática inducida por bicarbonato, mediante la exclusión de AMPc en ambas especies. También caracterizamos a MRP4 en humanos y determinamos la exclusión del nucleótido a través de dicho transportador. Sin embargo, hasta el momento no se ha dilucidado su rol en la fisiología espermática en esta especie. El objetivo de este trabajo consistió en evaluar la participación de MRP4 en la vía de fosforilación dependiente de AMPc durante la capacitación espermática en humanos. Para este estudio se utilizaron 24 muestras espermáticas de hombres normozoospérmicos. En primer lugar, corroboramos la presencia de MRP4 mediante la técnica de western blot (~150 kDa) y su localización celular, mediante inmunofluorescencia, en la región post-acrosomal y la pieza media (79.41±10.88%). La capacitación espermática se correlaciona con un incremento en los niveles de proteínas fosforiladas en residuos tirosina (pTyr), mediada por la vía de AMPc/proteína quinasa A (PKA). Por ello, realizamos incubaciones en condiciones no capacitantes (NC) y capacitantes (CAP) (medio HTF; bicarbonato 25 mM y BSA 5 mg/ml) durante 360 min (0, 5, 30, 60 y 360) evaluando los niveles de residuos fosforilados por PKA (pPKA) y pTyr. Observamos un aumento significativo en los niveles de pPKA en espermatozoides incubados en medio CAP respecto a NC a los 5 y 30 min, y un aumento significativo en los niveles de pTyr en espermatozoides incubados en medio CAP respecto a NC a los 360 min. Este resultado concuerda con lo descripto previamente para esta especie. Para evaluar la influencia de la función de MRP4 en esta vía, incubamos espermatozoides en medio NC y CAP, en presencia o ausencia de su inhibidor específico MK571. Se observó un aumento significativo en los niveles de pPKA en espermatozoides incubados en NC+MK571 respecto a NC a los 5 min, y una disminución significativa en los niveles de pTyr en espermatozoides incubados en CAP+MK571 respecto a CAP a los 360 min. Esta disminución coincide con lo observado previamente en la especie murina. La incubación de los espermatozoides con AMPc no permeable no revirtió los efectos producidos por MK571 sobre los niveles de pPKA ni los de pTyr en los tiempos evaluados. Esto sugiere que el MRP4 estaría participando en la regulación de los niveles intracelulares de AMPc y como consecuencia modulando los niveles de fosforilación en las vías de señalización dependientes del nucleótido. Futuros estudios nos permitirán establecer si el AMPc excluido a través de MRP4 tiene implicancias en la regulación de otras vías moleculares asociadas a la capacitación en el espermatozoide humano