La adhesión y polarización de células de carcinoma hepatocelular inducidas por Gal-1 son dos procesos relacionados

M L BACIGALUPO; M MANZI; P CARABIAS; M T ELOLA; M C MUÑOZ; F P DOMINICI; G RABINOVICH; C WOLFENSTEIN DE TODEL; M V ESPELT; M F TRONCOSO

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; LV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2010

Resultados previos indican que Galectina-1 (Gal-1), una proteína con afinidad por b-galactósidos, promueve la adhesión y polarización de células de carcinoma hepatocelular HepG2.   Con el fin de evaluar si estos efectos son específicos de Gal-1, se investigó el efecto de Gal-3, otra galectina sobreexpresada en estas células. Gal-3 aumentó el porcentaje de células adheridas (142±10%) pero no tuvo efecto sobre la polarización (determinada como porcentaje de canalículos biliares teñidos con faloidina-TRITC). Mediante Western blot, se demostró que Gal-1 induce la fosforilación de ERK pero no de Akt mientras que no afecta los niveles de expresión de las proteínas marcadoras de membrana apical, MDR1 y MRP2.  Para evaluar si la polarización  inducida por Gal-1 es un efecto secundario al aumento de la adhesión o, si por el contrario, los mismos son dos efectos independientes, se permitió la adhesión de las células sobre cubreobjetos durante 4 h y luego: a) se agregó Gal-1 recombinante (rGal-1) (7 µM) o b) se transfectó con el siRNA específico (80 nM). Mediante Western blot, se determinó que los niveles de expresión de Gal-1 disminuyeron significativamente con respecto a los niveles de b-actina (65,70±2,22% y 52,68±6,26%) luego de 48 y 72h respectivamente. El siRNA control no tuvo efecto sobre la expresión de Gal-1. Cuando rGal-1 se agregó a las células ya adheridas no se observaron diferencias significativas (134±3%) con respecto al control (en ausencia de rGal-1; 94±15%). Entonces, la presencia de rGal-1 al momento de plaquear las células es necesaria para promover un aumento en la polarización (156±5%). Por otro lado, el silenciamiento de Gal-1, 4h después de la adhesión, no produjo diferencias significativas en la polarización (90±5%) respecto a las células transfectadas con el siRNA control (104±15%). En conclusión, nuestros resultados indican que los efectos de Gal-1 sobre la polarización son específicos, secundarios a los efectos sobre la adhesión, involucran la vía de transducción de señales de ERK sin afectar la expresión de MDR1 y MRP2.