Método para analizar el estado físico del papillomavirus humano tipo 16

CAVATORTA, AL; CHOUHY, D; BERCOFF, M; CERDA, MB; BOTTAI, H; LEIVA, M; MAMPRIN DANDREA, R; GARDIOL, DN; GIRI AA

Buenos Aires

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008

Sociedad Argentina de Virología

En América Latina, el cáncer cervical es la segunda neoplasia más frecuente que afecta a la mujer, después del cáncer de mama. La infección con papillomavirus humanos (HPV) oncogénicos es considerada el factor necesario para el desarrollo de esta patología. Los HPV son un grupo heterogéneo de virus sin envoltura con un genoma de ADN doble hebra circular de aproximadamente 8 kb. Los HPV oncogénicos, como el HPV-16, integran su ADN al genoma celular a través de la ruptura de la región E1/E2 de HPV. E2 codifica para una proteína que regula la transcripción viral y su pérdida permite la expresión de los oncogenes virales, E6 y E7, y el inicio de la transformación celular. Por lo tanto, la integración del ADN viral en el genoma celular es considerada un evento clave en la carcinogénesis asociada a HPV. En este trabajo presentamos el desarrollo, optimización y aplicación del E2/E6 PCR-16, un ensayo de co-amplificación de fragmentos de los genes E2 y E6 de HPV-16, hibridación líquida con sondas específicas para cada gen y revelado colorimétrico. El cociente E2/E6 se calcula a partir de las absorbancias obtenidas en la detección colorimétrica de cada amplicón. Cada estado físico de HPV-16 (episomal, integrado y mixto) se mimetizó con diluciones de plásmidos en un rango de 100-1.000 copias/reacción y un modelo de regresión logit generalizado con respuesta politómica y variable regresora continua. En base a este análisis, el estado físico viral más probable según el valor del cociente E2/E6 estaría definido de la siguiente manera: 1) estado episomal: E2/E6 > 0,61; 2) estado mixto: E2/E6= 0,15-0,61; y 3) estado integrado: E2/E6 < 0,15. Posteriormente, el E2/E6 PCR-16 fue utilizado como instrumento para el análisis del estado físico del ADN de HPV-16 en relación a la evolución clínica y virológica en muestras secuenciales provenientes de 9 mujeres con lesiones cervicales e infectadas con ese virus. El estado de infección fue determinado con el L1HPVPCR, ensayo desarrollado previamente en nuestro laboratorio que permite detectar y tipificar 15 tipos de HPV. De las 9 pacientes, 2 mostraron concordancia en todos los parámetros analizados, en 4 hubo concordancia entre la evolución del estado físico y la evolución clínica, y en 2, entre la evolución del estado físico y la evolución virológica. Se hallan en curso experimentos de PCR en tiempo real que permitan cuantificar de manera precisa las cantidades de E2 y E6 obtenidas en plásmidos y en las pacientes para validar los datos obtenidos con el ensayo E2/E6 PCR-16.