Aplicación de diferentes técnicas para la extracción y purificación de fitohormonas

FERNÁNDEZ, CRISTIAN; VIGLIOCCO, ANA; ANDRADE, ANDREA; MASCIARELLI, OSCAR; ALEMANO, SERGIO

Jornada; XXVIII Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2010

La utilización de un método sensible y fácil para cuantificar en forma simultánea varias clases de hormonas vegetales facilitará en gran medida la investigación de las interacciones hormonales y sus funciones fisiológicas. El objetivo de este trabajo fue comparar tres técnicas para la extracción y purificación de diferentes clases de hormonas: Ácido jasmónico (JA), Ácido salicílico (SA) y Ácido abscísico (ABA). Estas fitohormonas fueron evaluadas en plántulas de girasol del híbrido comercial Paraiso 24. Para la extracción y purificación se usaron columnas de intercambio aniónico (Sephadex A-25) (Miersch et al., 2008) para JA y SA, partición líquido-líquido (Durgbanshi et al., 2005) para JA, SA y ABA y mini-columnas de intercambio aniónico amino (NH2) (Luna et al., 1993) para ABA  Posteriormente se realizó una cromatografía líquida de alta presión (HPLC) con una columna C18 de fase reversa. Para la identificación y cuantificación de las hormonas antes mencionadas se empleó un espectrómetro de masas en tándem acoplado al HPLC mencionado con anterioridad (LC-MS/MS). Los resultados demuestran que no hubo diferencias estadísticamente significativas en los niveles endógenos de JA, SA y ABA entre las metodologías de extracción ensayadas (Sephadex A-25, partición líquido-líquido y mini columnas NH2). No obstante, la utilización del método de partición líquido-líquido sería el más conveniente cuando varias hormonas con diferentes estructuras químicas y propiedades físico-químicas requieren ser extraídas de un extracto vegetal en forma rápida, simultánea, menos costosa y laboriosa. Al mismo tiempo, este método permite una remoción más eficiente de lípidos, haciéndolo más adecuado en determinaciones hormonales de cultivos oleaginosos como girasol.