Amplificación de un fragmento del gen cbhI del hongo de pudrición blanca Ganoderma applanatum cepa F.

GIORGIO EM, CONIGLIO RO, MORALES AL, VILLALBA LL, ZAPATA PD

Corrientes

Congreso; XL Congreso Argentino de Genética. III Simposio Latinoamericano de Citogenética y Evolución. I Jornadas Regionales SAG-NEA.; 2011

La degradación de la celulosa esta mediada por un complejo celulolítico, entre las enzimas celulolíticas, las celobiohidrolasas (CBH) son las más abundantes. El conocimiento de la constitución génica de las mismas resulta necesario para buscar aplicaciones biotecnológicas en la producción de bioetanol. El objetivo del trabajo fue amplificar y secuenciar un fragmento del gen cbhI del hongo de pudrición blanca Ganoderma applanatum cepa F mediante cebadores degenerados. Para estandarizar la PCR se ajustaron los parámetros Tm, concentración de MgCl2 y número de ciclos hasta conseguir las condiciones óptimas. Los resultados de la amplificación se visualizaron en geles de agarosa y poliacrilamida, se secuenciaron y se analizaron mediante los programas megablast, blastx y blastp del NCBI. Para las condiciones Tm 57 °C, MgCl2 3 mM y 40 ciclos se obtuvo una banda de 300 pb. El análisis de la secuencia génica obtenida reveló un 80% de identidad con el gen cbhI del hongo Irpex lacteus y se identificó un intrón en dicha secuencia. A su vez, el análisis de la secuencia proteica predicha reveló un 60% de identidad con la proteína celulasa de I. lacteus, detectándose sitios conservados para la familia 7 de las glicosil-hidrolasas y observándose la presencia de dos GLU, fundamentales para la actividad catalítica de la enzima. Con estos resultados, la secuencia obtenida en G. applanatum cepa F pudo reconocerse como un nuevo miembro de las celobiohidrolasas.