EVALUACIÓN DE LA RESPUESTA PROTECTORA CONFERIDA POR BLSOMP31 UTILIZANDO DIFERENTES ESTRATEGIAS DE LIBERACIÓN PARENTERAL Y MUCOSAL EN EL MODELO MURINO CONTRA BRUCELLA OVIS

MORAN, M. C. ; BENCE, A. R; DOMINGUEZ, M.P; SÁNCHEZ VALLECILLO, M. F.; RODRÍGUEZ, M.; RIVERO, M.A.; ZYLBERMAN, V.; GOLDBAUM, F.; MARCIPAR, I.; MALETTO, B.; PALMA, S.; LÜTSZELSCHWAB, C.M; ESTEIN, S.

Tandil

Jornada; II Jornadas internas de Investigación y Posgrado, FCV, UNCPBA; 2019

Brucella ovis es el agente causal de la epididimitis contagiosa del carnero. Actualmente, no existe vacuna específica para su prevención. El objetivo de este trabajo fue evaluar la respuesta inmunitaria y la protección conferida por BLSOmp31 utilizando diferentes sistemas de liberación de este inmunógeno a nivel parenteral y conjuntival. Brevemente, se realizaron dos ensayos consecutivos en los que se utilizó como inmunógeno la quimera BLSOmp31 constituida por Brucella Lumazina Sintetasa expresando un péptido de la proteína de membrana Omp31 de Brucella en cada uno de sus diez extremos. En ambos ensayos de utilizaron ratones BALB/c hembras que fueron distribuidos en distintos grupos de inmunización (G). Ensayo I: BLSOmp31 fue coadministrada con secuencias CpG-ODN en un sistema nanoestructurado de cristal líquido (Coagel) (BLSOmp31/CpG-ODN/Coagel) y Ensayo II: BLSOmp31 se formuló con ISPA. Ensayo I: Ratones (n=10/G) fueron inmunizados con G1) BLSOmp31/CpG-ODN/Coagel vía subcutánea (SC) y G2) BLSOmp31/CpG-ODN/Coagel vía ocular (O), los días 0 y 30 (BLSOmp31 (30µg/dosis) y CpG-ODN (30µg/dosis) en Coagel). Ensayo II: Ratones (n=12/G) se inmunizaron bajo el mismo esquema con: G1) BLSOmp31/ISPA vía SC y G2) BLSOmp31/ISPA vía O (BLSOmp31 30µg/dosis e ISPA al 3%. En los dos ensayos se incluyó un G3) PBS (control). Los días 0, 21, 51 y 90 se extrajo sangre para suero y, los días 65 y 90, muestras de saliva y de secreciones ocular, nasal, traqueobronquial, vaginal y de materia fecal. El análisis de IgG, IgG1, IgG2a e IgA en suero y de IgG e IgA en secreciones se realizó mediante ELISA (las muestras y determinaciones no coinciden entre los ensayos). El día 65, el 50% de los ratones se inoculó por la vía intraperitoneal con B. ovis y el otro 50% se sacrificó para realizar cultivo de esplenocitos y cuantificación de IFN-ɣ e IL-4. El día 90, los ratones inoculados fueron sacrificados y los bazos procesados bacteriológicamente para recuento de Unidades Formadoras de Colonia (UFC). Los títulos de IgG e IgA alcanzaron niveles significativos en los grupos inmunizados por la vía SC tras la primera inmunización y máximos al momento del desafío con un perfil mixto IgG2a/IgG1. Se obtuvo un leve aumento en el título de IgA en secreciones nasales, traqueobronquiales y vaginales, y de IgG en secreciones oculares, nasales, traqueobronquiales, vaginales y de materia fecal en ratones inmunizados con BLSOmp31/ISPA vía SC. La producción de IFN-ɣ en los grupos BLSOmp31/CpG-ODN/Coagel y BLSOmp31/ISPA por la vía SC fue estadísticamente significativa comparada con el grupo control (p< 0,05). Ambas formulaciones protegieron significativamente contra B. ovis con los siguientes log de protección: BLSOmp31/CpG-ODN/Coagel vía SC (3,61) y vía O (3,66); BLSOmp31/ISPA vía SC (2,83) y vía O (3,01). Nuestros resultados preliminares indican que CpG-ODN/Coagel o ISPA son sistemas de liberación de BLSOmp31 que protegen contra B. ovis al administrarse por la vía subcutánea u ocular y nos alientan a ensayar estas formulaciones en el ovino. Sin embargo, sin embargo, dada la especificidad de especie de las secuencias CpG-ODN y el costo de las mismas, evaluaremos la formulación BLSOmp31 teniendo en cuenta que protegió sino que también indujo una respuesta inmunitaria en distintas mucosas.