Presencia de diacilglicerol kinasa dzeta (DAGKz) en núcleos de la retina de vertebrados

NATALINI, PAOLA; ZULIAN SANDRA E.; GIUSTO NORMA M.; ILINCHETA DE BOSCHERO, M.G.

Córdoba

Congreso; VII Congreso de la Asociación para Investigación en Visión y Oftalmología. (AIVO); 2010

Los fosfolípidos nucleares se localizan no sólo en la membrana  nuclear sino también en la matriz nuclear y asociados a la cromatina. La señal lipídica intranuclear descripta está relacionada al metabolismo de los lípidos del inositol, lípidos de colina y el ciclo de deacilación. La producción de diacilglicéridos (DAG) ha sido asociada a la atracción y activación de PKC, y la actividad DAGK al control de la activación de PKC, con participación en la señalización de factores de crecimiento. La isoforma DAGK dzeta (tipo IV) se ha probado que, en células en cultivo, se localiza en núcleos y regula la concentración de DAG. El objetivo de este trabajo fue determinar su presencia y actividad en los núcleos de la retina de vertebrados. La presencia de la isoforma se determinó en dos modelos experimentales, en cortes de retina de rata y en núcleos aislados de retina bovina. Se utilizó inmunohistoquímica e inmunofluorescencia. Para la medida de actividad se aislaron los núcleos de las retinas bovinas y se ensayaron en condiciones de activación de la isoforma. Las retinas fueron homogeneizadas en medio TKM con sacarosa 0.25 M y purificadas en un gradiente de sacarosa. El pellet obtenido representa la fracción nuclear y la pureza del mismo se chequeó por tinción de los núcleos con DAPI. La medida de la actividad DAGK se realizó utilizando DAGs marcados (glicerol-[3H]). El ensayo de DAGK se realizó en micelas de detergente-lípido utilizando Tritón X100 y 2 mM de ATP. La actividad enzimática se midió aislando el ácido fosfatídico (PA) mediante CCF. En 5 min de incubación se detectó formación de PA (6 % del sustrato DAG fue transformado). La fosfatidilserina (activador de la isoforma dzeta) estimuló la actividad en un 60 %. El R59022, inhibidor de isoformas de tipo I, solo inhibió parcialmente dicha actividad (30 %).  Los resultados indican que la isoforma se halla presente en los núcleos de la retina y que las condiciones de ensayo son adecuadas para su estudio.