La translocación de la diacilglicerol kinasa (DAGK) y su activación por PKC como reguladora de la translocación de arrestina en segmentos externos de vertebrados.

ZULIAN S.E.; NATALINI P.; ILINCHETA DE BOSCHERO M.; GIUSTO N.M.

Mar del Plata

Congreso; XLII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental (SAFE); 2010

SAIC

Uno de los mecanismos de desactivación de la acción de la luz en células fotorreceptoras de la retina de vertebrados es la translocación de enzimas ligadas a la fototransducción lo que favorece la adaptación a la luz. Mientras que transducina transloca hacia el segmento interno (RIS), arrestina (Arr) lo hace en el sentido opuesto. La translocación de Arr hacia los segmentos externos (ROS) es mediada por la activación de PIP2-PLC y de PKC y no tiene lugar en ausencia de fosforilación por PKC (Orisme et al, 2009). Hemos reportado la translocación de DAGK dependiente de luz en retinas de ratas adaptadas a oscuridad y también en preparaciones de ROS de retinas bovinas luego de la exposición de la copa del ojo a la luz (Zulian et al, IVO 2009). Para evaluar: 1) la relación entre la translocación por luz de DAGK y la producción de su sustrato mediado por la activación de la PIP2-PLC; 2) si la fosforilación por PKC regula la actividad de DAGK, se utilizaron ambos modelos experimentales. Para responder 1) se expusieron los ojos enucleados (ratas adaptadas a oscuridad) a la acción de la luz en ausencia y en presencia del inhibidor de PIP2-PLC, U73122. Se utilizó inmunohistoquímica empleando a-DAGKe y a-arrestina visual.  U73122 antes y durante la exposición a la luz bloqueó la migración de DAGKe, manteniendo su ubicación en el RIS, mientras que la translocación de Arr también fue afectada, ya que se distribuyó entre ambos compartimientos. Para responder 2), los ROS aislados en luz se expusieron a la presencia de activadores de fosfatasas, de inhibidores de la fosforilación en Ser-Treo y de estimuladores de PKC. La actividad DAGK sobre DAGs endógenos fue inhibida por el empleo de fosfatasas exógenas y estimulada por Ac. Okadaico y por estimuladores de PKC típicas (DAG, PS y Ca++). Nuestros resultados indicarían que en la translocación de Arr, dependiente de la activación de PIP2-PLC y PKC, la translocación de la DAGK podría ser un componente regulador esencial.