Aplicación de RNAi para el estudio funcional de genes del integumento en triatominos, vectores de la Enfermedad de Chagas

CALDERÓN FERNÁNDEZ, G. M.; A. B. DULBECCO; D. E. MORICONI; GIROTTI, J. R.; N. PEDRINI; MCCARTHY, ANDRÉS

Congreso; XI Congreso Argentino y XII Congreso Latinoamericano de Entomología; 2022

El integumento es el tejido más externo de los insectos y comprende la cutícula y la epidermissubyacente. Las células de la epidermis son responsables de la síntesis de los componentes cuticularesy participan en el metabolismo general del organismo, por lo que el integumento es esencial para lasupervivencia y fisiología de los insectos. Empleando como insectos modelo a los triatominos Rhodniusprolixus y/o Triatoma infestans se caracterizó molecularmente y se estudió la función del ácido grasosintasa 3 (FASN3) y citocromos P450 subfamilia 4G (CYPs4G) que participan en la síntesis de lípidoscuticulares, y genes CYP del clan 4, involucrados en la detoxificación de xenobióticos. Se analizó suexpresión mediante PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR), su interacción con ligandos mediante dockingmolecular, y su funcionalidad mediante silenciamiento génico por RNAi, evaluando posteriormentelos fenotipos resultantes del silenciamiento mediante qPCR, cromatografía gaseosa capilar acoplada aespectrometría de masas, bioensayos de supervivencia, exposición a deltametrina. Se observó que elsilenciamiento de la expresión de FASN3 era letal para los insectos, correlacionándose con una marcadadisminución en el contenido de ácidos grasos e hidrocarburos totales (lineales y ramificados), especialmentelos hidrocarburos ramificados. Por otro lado, el silenciamiento de los dos genes CYP4G (CYP4G106y CYP4G107) demostró por primera vez in vivo en insectos su especificidad en la formación preferencialde hidrocarburos lineales o ramificados. Asimismo, se identificaron nuevas familias de genes CYP4 delintegumento (CYP3093 y CYP4EM) que representan expansiones génicas exclusivas de triatominos conalta afinidad de unión a deltametrina, funciones de detoxificación de xenobióticos, y una regulaciónconjunta compleja en cuanto al silenciamiento de sus miembros. El silenciamiento del gen CYP4PR1 dela familia CYP4EM aumentó la susceptibilidad a la deltametrina de insectos resistentes a piretroides. Enconjunto, estos resultados resaltan la importancia fundamental del integumento de insectos en su rol debarrera de protección frente a las condiciones ambientales y la penetración de insecticidas.