CARACTERIZACIÓN CUADRO CLINICO ASOCIADO A LA INFECCION POR EL VIRUS DE LA GASTROENTERITIS TRANSMISIBLE PORCINA. DETECCIÓN Y PRIMERA MOLECULAR

ASPITIA C; NEGRELLI PILAR M; PÉNDOLA C; PEREZ, A; BOTTINO A; CAPPUCCIO J; PERFUMO CJ; QUIROGA MA; ECHEVERRIA M. G; SERENA MS

Córdoba

Jornada; XX1 Jornadas de Actualización Porcina; 2022

INTRODUCCIÓNLos cuadros de diarrea en cerdos generan una mayor mortalidad en lechones lactantes, sin embargo, revisten importancia en todas las categorías productivas. Dentro de los agentes virales más frecuentemente asociados a las diarreas neonatales (DN) podemos mencionar Rotavirus y Coronavirus. Las lesiones que producen los diferentes virus son difíciles de distinguir tanto macro como microscópicamente, por lo cual la identificación específica de cada uno requiere la aplicación de técnicas de diagnóstico como inmunohistoquímica, aislamiento viral y técnicas moleculares (1).El virus de la gastroenteritis transmisible (TGEv) pertenece a la familia Coronaviridae, género Alphacoronavirus, asociado a un cuadro clínico caracterizado por diarrea y anorexia de rápida diseminación en establecimientos naive (1). En el año 2014, el SENASA reportó la presencia del TGEv en Argentina ante la OIE, luego de detectar serología positiva en una granja pequeña sin signos clínicos visibles (2). Luego, diferentes cuadros sospechosos fueron reportados y en alguno de ellos el virus fue identificado por microscopía electrónica y técnicas de inmunohistoquímica (1).El objetivo del presente trabajo es describir la forma clínica y patológica de un cuadro clínico de diarrea, donde se identificó y logró por primera vez caracterizar molecularmente al TGEv. MATERIAL Y MÉTODOS En junio de 2021 se recibieron dos lechones de 18 (A) y 26 (B) días de edad, para realizar estudios anatomopatológicos en el Laboratorio de Patología Especial Veterinaria, FCV-UNLP, provenientes de una granja de 500 madres multisitio ubicada en la provincia de Bs.As., que presentaba un cuadro clínico de diarrea liquida amarillenta, de pH ácido, de varios meses de evolución. Durante el transcurso del brote, animales de todas las categorías presentaron diarrea, que luego persistió en lechones de maternidad y destete. El cuadro clínico se caracterizó por diarrea liquida amarilla que iniciaba alrededor de los 15 días de vida y aumentaba su presentación en el destete, con una morbilidad del 20 %, sin respuesta al tratamiento con antibióticos. Posteriormente al diagnóstico de las primeras muestras se realizó un muestreo dirigido que incluyó 3 visitas en el cual se tomaron 96 muestras de hisopado rectal de lechones de maternidad y 46 de recría, y se realizó la necropsia de 3 lechones. Se tomaron muestras de intestino delgado y grueso para estudios histopatológicos y detección TGEv mediante PCR en el Laboratorio de Virología-CEMIBA, FCV-UNLP. Además, en colaboración con SENASA, se realizó el sangrado de 10 madres y la detección de anticuerpos que fue realizada en la Dirección General de Laboratorio y Control Técnico (DILAB).Las muestras de materia fecal e intestino delgado fueron diluidas en PBS Tween 0,05 % en una proporción 1/10 y a partir de las mismas se realizó la extracción de ARN y posterior retrotranscripción. En primer lugar se buscó la presencia de Pancoronavirus (gen de la polimerasa) por PCR, y aquellas muestras positivas se analizaron por la misma técnica en busca de TGEv (gen que codifica para la proteína N). Las muestras de intestino delgado y grueso fueron procesadas mediante técnicas de rutina y teñidas con H&E. Además, se llevó a cabo la técnica de inmunohistoquímica (IHQ) utilizando un anticuerpo comercial anti-coronavirus. Asimismo, se realizó la observación directa mediante microscopia electrónica a partir de las muestras de materia fecal procesadas para tal fin. Finalmente, se amplificó por PCR en forma parcial el gen que codifica para la proteína S. Luego el fragmento fue purificado y secuenciado en la Unidad Genómica INTA, Castelar. La secuencia obtenida fue analizada mediante NCBI BLAST y comparada con aquellas de referencia disponibles en el Genbank. RESULTADOSEn el lechón B se detectó material genético correspondiente a Pancoronavirus y TGEv. Los estudios histopatológicos evidenciaron leve atrofia de vellosidades, linfangiectasia, hiperemia en submucosa y leve infiltrado linfoplasmocítico correspondiente con una enteritis atrófica compatible con posible infección viral. La técnica de IHQ realizada sobre los mismos cortes arrojó una inmunomarcación positiva en los enterocitos de recubrimiento de las vellosidades de intestino delgado. Sobre el análisis de las muestras tomadas en el muestreo dirigido se detectó 43 muestras positivas para Pancoronavirus (17 de maternidad y 26 de recría), y un total de 26 muestras positivas para TGEv (14 de maternidad y 12 de recría). Dos de las muestras de suero resultaron positivas para la detección de anticuerpos contra TGEv, y ninguna de las muestras fue positiva a PEDv (virus de la diarrea epidémica porcina). La observación mediante microscopia electrónica puso en evidencia la presencia de varias partículas con morfología y tamaño compatible con coronavirus. La secuencia obtenida si bien arrojó el mayor porcentaje de similitud con la cepa Purdue (>86%) como así también con otras cepas de referencias de TGEv, es necesario realizar un análisis del gen S completo para lograr definir su identidad y clasificación. DISCUSIÓNLas lesiones observadas en los estudios histopatológicos y la signología clínica presente al momento del muestreo sugieren la presencia de un agente viral como causa importante del cuadro clínico. La detección por PCR para TGEv en los lechones de necropsia y animales con diarrea pone en evidencia la implicancia del mismo en el cuadro observado. Este reporte, representa la primera detección molecular de TGEv en nuestro país.