ESTUDIOS PARA LA DETECCIÓN DE PCV2 Y PCV3 ASOCIADOS A LESIONES DEL SÍNDROME DE DERMATITIS Y NEFROPATÍA PORCINA

NEGRELLI PILAR M; SERENA MS; MACHUCA M; PERFUMO CJ; ARALDA C; QUIROGA MA

Mar del Plata

Jornada; XI Jornadas Internacionales de Veterinaria, Colegio de Veterinarios de la Provincia de Bs As; 2022

Colegio de Veterinarios Prov. Bs As

El síndrome de dermatitis y nefropatía porcina (SDNP) es una entidad que afecta a los cerdos en las etapas de desarrollo y engorde. Se caracteriza por lesiones cutáneas multifocales rojo-violáceas y riñones pálidos con hemorragias petequiales. La lesión microscópica típica consiste en una vasculitis generalizada y glomerulonefritis sugestivas de una reacción de hipersensibilidad tipo III, mediada por inmunocomplejos. Su etiología, aún no demostrada en forma experimental, se asocia con la infección por circovirus porcino 2 (PCV2) (1). PCV2 es un virus pequeño, sin envoltura, ADN de cadena simple vinculado a un grupo de entidades clínico-patológicas que se engloban bajo la denominación PCVAD (PCV Associated Diseases) y que incluye, entre otras, al SDNP (2). Circovirus porcino 3 (PCV3), se describió en EEUU en 2017 asociado a un cuadro SDNP-like que se presentó en cerdas con problemas reproductivos (3). A partir de este reporte, PCV3 ha sido descripto en diferentes países y en diversas especies animales (4). En Argentina la primera comunicación de infección por PCV3 se realizó en el año 2020 en una granja con problemas reproductivos con incremento en las tasas de momias y natimortos, detectándose genoma viral en los tejidos fetales (5). En el presente trabajo se llevó a cabo un estudio retrospectivo de casos con diagnóstico de SDNP orientado a la detección de PCV2 y PCV3 en riñón y en linfonódulos. MATERIALES Y MÉTODOSSe seleccionaron 15 casos de archivo, con diagnóstico histopatológico de SDNP, correspondientes al periodo 2013-2021, que incluyeron muestras de animales de desarrollo y de engorde con antecedentes, en algunas de las granjas de origen, de enfermedad sistémica por PCV2. Se reevaluaron las lesiones renales clasificándolas en agudas y crónicas y se determinó la ocurrencia o no de linfadenitis granulomatosa. Se aplicó la técnica de inmunohistoquímica (IHQ) para la detección de antígeno de PCV2 en cortes parafinados de riñón y linfonódulo. Se utilizó un anticuerpo policlonal anti-PCV2 (ISUVDL, IOWA, USA), en dilución 1:800 y se aplicó el procedimiento descripto por Morandi 2010 (6). Se incluyeron controles positivos y negativos de tejido y de la reacción. Para la detección de genoma de PCV2 y de PCV3, se partió de los bloques de tejidos parafinados (riñón y linfonódulo) que se desparafinaron y rehidrataron en alcoholes decrecientes. La extracción de ADN se realizó con un kit comercial (High Pure PCR Template Preparation Kit, Roche). Posteriormente, se utilizó la técnica de PCR con primers para el gen citocromo B como control interno (gen cytB) (7). La detección de fragmentos del gen cap de PCV2 y PCV3, se realizó mediante PCR convencional, siguiendo los protocolos descriptos previamente (5, 8). RESULTADOSDe los 15 casos de SDNP, 9 presentaron lesiones de curso agudo observándose moderada a grave glomerulonefritis fibrinosa y necrotizante con nefritis intersticial no supurativa, incluyendo 3 casos en que se identificó vasculitis con necrosis fibrinoide en la pelvis renal. En los 6 animales restantes, se reconocieron lesiones crónicas con glomeruloesclerosis y fibrosis intersticial. Se contó con muestras de linfonódulo en 11 casos, 4/11 no presentaron lesión y en 7/11 se observó linfadenitis granulomatosa. Mediante el estudio IHQ y por PCR se demostró la presencia de antígeno/ácidos nucleicos de PCV2 en 7/15 casos: 4/7 resultaron positivos tanto en riñón como en linfonódulo y correspondieron a lesiones renales agudas y linfadenitis granulomatosa. Los 3/7 casos restantes resultaron positivos solo en linfonódulo, mediante la técnica de PCR. Del total de casos analizados 8 fueron negativos por ambas técnicas. La técnica de PCR para PCV3 arrojó resultados negativos en todas las muestras.DISCUSIÓN En Argentina, el SDNP asociado a la infección por PCV-2 fue descrito en 2000 (9). Desde entonces, se han notificado brotes, especialmente en cerdos de engorde, algunos de ellos relacionados con la coinfección con otros agentes patógenos como Salmonella sp, (10). Desde 2006 la vacunación masiva contra PCV2 ha reducido las pérdidas económicas atribuidas a las PCVAD y ha contribuido a que la presentación del SDNP sea esporádica. En 2017, se describió una nueva condición similar al SDNP que afectó a cerdas con trastornos reproductivos (abortos, momias y mortinatos) y muerte. La secuenciación metagenómica a partir de distintos tejidos, reveló la presencia de un nuevo circovirus clasificado como PCV3 (3). Desde entonces también se han notificado casos similares a SDNP, negativos para PCV2 y con detección de PCV3, en cerdos de destete y engorde (11, 12, 13). En el presente trabajo, la demostración de antígeno y ácidos nucleicos de PCV2 en riñón se dio en un muy bajo porcentaje, en concordancia con lo observado en Argentina en los primeros años de la enfermedad (14), y solo en casos de lesiones renales agudas. En cambio, la identificación fue mayor en linfonódulos, tal como han descripto otros autores (15). Por otra parte, la evaluación retrospectiva de casos con lesiones de SDNP, mediante qPCR e IHQ para PCV3, demostró que el 93,8% y el 6,2%, respectivamente, resultaron positivos (9). En nuestro estudio los resultados negativos para PCV3 mediante PCR convencional, deberían ser confirmados por qPCR, técnica de mayor sensibilidad. Al presente, numerosos son los trabajos que informan detección de PCV3 en tejidos y otras muestras provenientes de animales con variados cuadros de enfermedad, pero su relevancia clínica a campo aun es desconocida (4). Si bien los criterios diagnósticos no han sido aún consensuados, la información con que se cuenta en la actualidad ha llevado a considerar a PCV3 como agente asociado a síndrome inflamatorio multisistémico, a cuadros de insuficiencia reproductiva con lesiones de SDNP y a la ocurrencia de infección subclínica (4). CONCLUSIÓNEn los casos de SDNP evaluados solo se detectó PCV2, mediante PCR e IHQ, en las lesiones renales agudas y en linfonódulos con lesiones granulomatosas. Se hace necesario estudios anatomopatológicos más exhaustivos y la aplicación de técnicas de mayor sensibilidad para determinar el rol de PCV3 en la patogenia del SDNP.