CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DEL VIRUS ORF EN BROTES DE ECTIMA CONTAGIOSO QUE OCURRIERON EN LA PATAGONIA ARGENTINA DURANTE EL AÑO 2014

MALLORY NAVARRO; CARLOS ROBLES; MAGALI VALENZANO; MARCELO AGUILAR; AGUSTIN MARTINEZ; ANDREA PERALTA

Jujuy

Congreso; ASOCIACIÓN ARGENTINA DE VETERINARIOS DE LABORATORIOS DE DIAGNÓSTICO; 2016

INTRODUCCIÓNEl Ectima contagioso (EC) es una enfermedad de origen viral de la piel (dermatitis pustular contagiosa) que afecta principalmente ovejas y cabras pero puede afectar también a otros rumiantes y animales salvajes. Los casos en el hombre están siempre asociados a veterinarios, trabajadores rurales o de plantas industriales que tienen contacto con cueros y lanas. Si bien la enfermedad es relativamente benigna, su presencia en el rebaño genera pérdidas económicas y actualmente es considerada una zoonosis de distribución mundial. El agente etiológico del EC, es el virus Orf (ORFV), el cual pertenece al género Parapoxvirus, dentro de la familia Poxviridae. El virus es muy resistente a la desecación y puede permanecer muchos años en costras secas de animales que padecieron la enfermedad. Estas se pueden esparcir en las pasturas logrando una alta dispersión geográfica. La transmisión se da principalmente por contacto con animales infectados o con sus costras.El objetivo general de este trabajo fue caracterizar a nivel molecular las cepas de ORFV que causaron brotes de Ectima en majadas ovinas y caprinas de la Patagonia durante el año 2014, con el fin de determinar el número y variabilidad de cepas que circulan en la región.MATERIALES Y MÉTODOSLos brotes de Ectima que se analizaron en este trabajo ocurrieron entre los meses de septiembre y noviembre de 2014, en establecimientos ovinos y caprinos de cuatro provincias patagónicas. Los establecimientos ganaderos eran cercanos a las localidades de: Pichi Neuquén (Neuquén), Pilcaniyeu (Río Negro), Comallo (Río Negro), Tecka (Chubut) y San Julián (Santa Cruz).Se tomaron muestras de costras en animales con diagnóstico clínico de Ectima en diferentes localidades de Patagonia por veterinarios integrantes del Sistema Regional de Salud Animal (SIRSA) del INTA Bariloche Las costras fueron disgregadas mecánicamente y se extrajo el ADN utilizando el kit QIAamp DNA mini kit (Qiagen). Se realizó una PCR basada en la amplificación del gen ORF045 (Kottaridi y col. 2006) con la finalidad de confirmar el diagnóstico clínico.Luego se procedió a la amplificación por PCR de tres marcadores moleculares: los genes ORF020, ORF109 y ORF127. Los genes ORF020 y ORF127 codifican para proteínas que interfieren con la respuesta inmune del hospedador, mientras que el gen ORF109 codifica para una proteína de superficie del virus que es inductora de anticuerpos neutralizantes. Los amplicones obtenidos fueron purificados y enviados a secuenciación por el método de Sanger en la unidad de Secuenciación y Genotipificación del CICVyA.Las secuencias obtenidas fueron comparadas con las secuencias de tres cepas de referencia depositadas en el GeneBank y con las secuencias de las dos cepas argentinas caracterizadas hasta el momento (Peralta y col. 2015). Se establecieron las relaciones filogenéticas computando las distancias genéticas entre los distintos virus (programa MEGA5; Kimura-2p, Neihgbor-Joinig, bootstrap de 1000).RESULTADOSEn la figura 1 se muestra la relación filogenética en el gen ORF020 entre las cepas de ORFV argentinas y las tres cepas de referencia. Las cepas que causaron los brotes en Pichi Neuquén (gNeu14), Tecka (sChu14) y Pilcaniyeu (sPil14) son idénticas para este marcador y están relacionadas con la cepa que causó el brote en Pilcaniyeu 2013 (sPi13).En la figura 2 se muestra la relación filogenética en el gen ORF109. Nuevamente se observa que las cepas gNeu14, sChu14 y sPil14 son idénticas, aunque para este marcador no se observa una relación con la cepa sPi13. Finalmente, en la figura 3 se muestra la relación filogenética en el gen ORF127, donde se observa una vez más que las cepas gNeu14, sChu14 y sPil14 son idénticas entre sí y diferentes a las cepas que causaron otros brotes durante el mismo período en la región patagónica.DISCUSIÓN En este trabajo se analizaron 5 aislamientos de virus ORF, de brotes ocurridos en cuatro provincias patagónicas y del mismo se concluye que (1) la cepa que causó el brote en Pilcaniyeu 2014 es diferente a la que ocasionó el brote en la misma majada pero en el año 2013 (2) los brotes ocurridos en las establecimientos de Pilcaniyeu (Río Negro), Tecka (Chubut) y Pichi Neuquén (Neuquén) en 2014 fueron causadas por la misma cepa viral (3) la cepa que causó el brote en San Julián (Santa Cruz) se encuentra distante filogenéticamente del resto de las cepas argentinas conocidas, al menos en 2 de los 3 marcadores analizados, mientras que la cepa que causó el brote en un establecimiento de caprinos en la localidad de Comallo (Río Negro) es distante filogenéticamente en los tres marcadores en estudio (4) durante septiembre y noviembre de 2014, en la región patagónica, circularon al menos tres cepas distintas de virus ORF.Esta co-circulación de cepas de virus ORF también fue observada en Brasil por Abrahao y col (2012) aunque en un intervalo de tiempo mayor al reportado en este trabajo.Cabe destacar que cepas idénticas del virus afectaron tanto a ovinos (sChu14 y sPil14) como caprinos (gNeu14), esto indicaría que la co-infección entre especies puede ocurrir en establecimientos donde se crían ambas especies con estrecho contacto. Estos hallazgos podrían explicar en parte los diferentes cuadros clínicos que suelen observarse a campo y las fallas vacunales que los productores suelen reportar.