Nanovesículas lipídicas de respuesta dual funcionalizadas con AuNPs como portadoras de doxorubicina: Herramientas de calidad por diseño para optimizar su obtención y evaluación de su utilidad en nanomedicina del cáncer.

TORRES, JAZMIN; CALDERÓN-MONTAÑO, JOSÉ; PRIETO-DAPENA, FRANCISCO; LÓPEZ-LÁZARO, MIGUEL; LONGHI, MARCELA; RUEDA, MANUELA; RABASCO, ANTONIO; GARCÍA, MÓNICA C*; GONZÁLEZ-RODRÍGUEZ, MARÍA LUISA*

Madrid

Congreso; XVI Congreso Sociedad Española de Farmacia Industrial y Galénica (SEFIG).; 2023

1.- Introducción. Entre los transportadores de base lipídica, las nanovesículas o liposomas (L) se han convertido en una de las herramientas más útiles para la administración de fármacos en el campo de la nanomedicina debido a su alta biocompatibilidad [1]. Recientemente, se han estudiado nanomateriales híbridos orgánicos/inorgánicos como plataformas prometedoras para aplicaciones terapéuticas, entre ellos, nanoportadores híbridos termo-sensibles para optimizar la farmacoterapia del cáncer [2].En estudios previos, se obtuvieron L cargados con doxorubicina (Dox) y funcionalizados con nanopartículas de oro (AuNPs-L-Dox) [1]. En este trabajo, para evaluar su desempeño como sistemas portadores, se propuso aplicar herramientas de calidad por diseño (QbD) para racionalizar el diseño experimental para funcionalizar los L-Dox con AuNPs. Tras la optimización, se evaluaron las propiedades de liberación de Dox desde estos sistemas y su utilidad en terapia de hipertermia óptica en nanomedicina del cáncer. 2.- Materiales y métodos. 2.1.- Preparación de L, encapsulación de Dox y funcioanalización con AuNPs. Se utilizaron los métodos de re-hidratación del film lipídico y gradiente de pH transmembrana para obtener L formados por 1,2-dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina, colesterol y bromuro de dimetil-dioctadecilamonio (DDAB), y para encapsular Dox, respectivamente [1]. Se utilizó un diseño de Taguchi (L9) para evaluar diferentes variables: relación L-Dox:AuNPs y condiciones de anclado (tiempo de agitación, temperatura y periodo post-funcionalización) para optimizar la funcionalización. Los datos obtenidos se analizaron matemática y estadísticamente, utilizando el software DOEpack 2000. 2.3.- Estudios de caracterización. 2.3.1.- Tamaño y potencial electrocinético. El diámetro hidrodinámico (dH), índice de polidispersión (PDI) y potencial electrocinético (ζ) de los sistemas obtenidos se analizaron mediante dispersión de luz dinámica y electroforética, respectivamente (equipo Zetasizer Nano-S).2.3.2.- Eficiencia de encapsulación Dox (%EE). La %EE de Dox se determinó mediante HPLC (Hitachi® La Chrom Elite) tras lisis de los L-Dox con Tritón X-100.2.3.3.- Absorción en el espectro UV-Visible. Los espectros de absorción UV-vis de L, Dox y AuNPs, y de las mezclas de L-Dox con diferentes proporciones de AuNPs se registraron en un espectrofotómetro UV-visible (Agilent 8453). Las posiciones de las posibles bandas de absorción solapadas se determinaron a partir de la 2° derivada.2.4- Estudios de liberación in vitro. Los sistemas AuNPs-L-Dox se sometieron a análisis de liberación de Dox y se compararon con una muestra de referencia de Dox pura. Los estudios se realizaron en celdas bicompartimentales de Franz, utilizando diferentes medios biorrelevantes (pH 7,4 y 5,1 a temperatura fisiológica e hipertermia inducida por irradiación IR). 2.5- Estudios en cultivos celulares. Se analizó la viabilidad celular de células normales de queratinocitos (HaCaT) y células de cáncer de ovario (SK-OV-3) y de mama (MDA-MB-231) tratadas con las nanovesículas o Dox pura a diferentes concentraciones y durante distintos tiempos, en presencia y ausencia de irradiación, utilizando el método de resazurina. 3.- Resultados y Discusión. Los sistemas L-Dox exhibieron tamaños nanométricos (355 nm), PDI aceptables (