Autofagia mediada por VMP1 como fuente de exosomas en el Adenocarcinoma Ductal Pancreático.

GARCIA, MARIA NOE; PAULA SEPÚLVEDA ACUÑA; TAMARA ORQUERA; MARIA INES VACCARO

Workshop; II Encuentro y Workshop IBIMOL 2016; 2016

Instituto de Bioquímica y Medicina Molecular

La autofagia recicla nutrientes, y remueve el material intracelular no deseado o dañado, incluyendo proteínas y organelas. En algunas situaciones, las células remueven este material a través de su liberación al medio en forma de vesículas extracelulares como los exosomas. La secreción de exosomas puede tener un impacto en las células vecinas o de tejidos distantes haciendo que estas generen una respuesta determinada. VMP1 (Vacuole embrane Protein 1) es una proteína de la membrana del autofagosoma, cuya expresión gatilla autofagia en células de mamífero. La expresión de VMP1 es activada en páncreas en situaciones de estrés y enfermedad como lo son el adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) y la pancreatitis aguda (PA). El objetivo del presente trabajo fue determinar la presencia extracelular de VMP1 en las patologías pancreáticas y determinar la presencia de la misma en exosomas.Para tal fin, se determinó por western blot, la presencia de VMP1 en suero de pacientes con PA, PDAC y suero de individuos sin patología pancreática. Hemos encontrado la presencia de VMP1 en suero humano y dicha presencia posee una tendencia diferencial en suero de pacientes con patología pancreática. VMP1 se detecta en suero aun con depleción de la albumina, indicando que su presencia no es debido a la unión con esta. Estos datos fueron validados mediante tres anticuerpos independientes contra epítopes de diferentes regiones de la proteína. Al ser VMP1 una proteína de la membrana del autofagosoma y sabiendo la relación existente entre la autofagia y la biogénesis de exosomas, el hecho de encontrarla en suero indica alta posibilidad de que se encuentre formando parte de exosomas. Se purificaron exosomas provenientes de suero humano de individuos sin patología pancreática y se determino la presencia de VMP1 en exosomas. Por último, se detectó VMP1 en exosomas purificados de una línea celular de carcinoma pancreático humano (MiaPaca2). Sin embargo, no se ha detectado en exosomas provenientes de la línea celular de cáncer de mama MDA-MB-231 demostrándose una detección diferencial entre ambas patologías.Nuestros resultados muestras por primera vez la presencia de una proteína de autofagia en exosomas de suero humano, la detección diferencial de VMP1 en exosomas proveniente de una línea celular de PDAC da luz al estudio de un posible biomarcador de dicha enfermedad.