PARTICIPACION DE LA CLATRINA Y EL PH ENDOSOMAL EN LA ENTRADA DE MIEMBROS DEL COMPLEJO DE ENCEFALITIS EQUINA VENEZOLANA

GHIETTO LUCÍA MARÍA; GIL PEDRO; OLMOS PALOMA; PIRIS FRANCO; KUNDA PATRICIA; CONTIGIANI MARTA; PAGLINI M GABRIELA

Modalidad virtual

Congreso; XIII Congreso Argentino de Virología 2021; 2021

Sociedad Argentina de Virologia

Los subtipos enzoóticos del complejo de Encefalitis Equina Venezolana (VEE) son virus de importancia medica-veterinaria, sin embargo, poco se conoce sobre los mecanismos de penetración y transporte dentro del citoplasma. Este trabajo tiene como objetivo obtener evidencias sobre la participación de la clatrina y el pH endosomal en el proceso de internalización y liberación del genoma de los virus Pixuna (PIXV) y Rio Negro (RNV) dentro del citoplasma. Para ello, se utilizaron cultivos de células Vero Clon 76 que fueron incubados con Sacarosa o Clorpromazina (inhibidores de la endocitosis dependiente de clatrina) y Glucosamina o Cloruro de amonio (inhibidores de la acidificación del pH endosomal) e infectados con PIXV o RNV. Se cuantificaron los sobrenadantes a las 4, 8 y 24 horas postinfección (hpi) mediante titulación por placas de lisis y las monocapas fueron procesadas para inmunofluorescencia (IFI). Por otro lado, células Vero fueron transfectadas con plásmidos de expresión para EPS 15 (proteína involucrada en la endocitosis dependiente de clatrina) en su forma wild type (WT) o dominante negativa (DN-EPS15) e infectadas con PIXV o con RNV y procesadas para IFI. Se observó una disminución significativa en los títulos virales extracelulares en los cultivos tratados con los inhibidores químicos específicos para la endocitosis dependiente de clatrina y para los agentes lisosomotropos a las 8 y 24 hpi, tanto para PIXV como RNV. En concordancia, el porcentaje de células infectadas determinado por IFI fue significativamente menor en los cultivos tratados e infectados con PIXV o RNV. Por otro lado, la sobreexpresión de DN-EPS15 provocó una disminución significativa en el porcentaje de infección en comparación con la forma WT, para ambos virus. En conclusión, nuestros resultados sugieren la importancia de la endocitosis dependiente de clatrina y el pH endosomal en la internalización de dos miembros del complejo VEE a la célula, para así continuar con su ciclo replicativo.