MICROPROPAGACIÓN DE PSEUDANANAS SAGENARIUS (ARRUDA) CAMARGO Y OBTENCIÓN DE ENDOPEPTIDASAS

MARTIN MA.INÉS; PIERSANTE NOELIA; TORRES MA.JOSÉ; NATALUCCI CLAUDIA L.

Capital Federal

Congreso; IX Feria Congreso Latinoamericano de Biotecnología - IV Congreso Argentino de Biotecnología; 2010

Foro Argentino de Biotecnología (FAB)

A partir de semillas germinadas in vitro se lograron establecer 2 líneas de Pseudananas sagenarius . Se utilizó, medio líquido salino MS (Murashige &Skoog) suplementado con BAP (1 mg/l), ANA (0,3 mg/l) y Paclobutrazol (PAC, 0,3 mg/l). El uso de Paclobutrazol, aumentó significativamente los índices de multiplicación. Se observó la formación de grupos de yemas compactas diferentes morfológica y anatómicamente a las formadas en medios no suplementado con PAC. Las condiciones de cultivo fueron: temperatura = 25 +/- 2 ºC, humedad = 55%; intensidad de luz = 10.000 lux, fotoperíodo = 16:8 horas luz/oscuridad. A cada una de las líneas se les extrajo el medio luego de 45 días de cultivo para el análisis de las endopeptidasas presentes en el mismo. Fue precipitado con acetona y concentrado en su redisolución (10X). Se determinó actividad caseinolítica utilizando como sustrato caseína al 1% (buffer Tris-ClH 0,1 M de pH 8,0, con cisteína 12 mM como activador). La mezcla de reacción fue incubada a 37 ºC y diferentes tiempos (0, 4, 10, 20, 60, 120 y 180 min). La reacción se detuvo mediante el agregado de ácido tricloroacético al 5%. La actividad fue medida como absorbancia a 280 nm. La actividad proteolítica fue de 0.254 Ucas/ml para la línea 1 y 0.306 Ucas/ml para la línea 2. Por isoelectroenfoque se detectó una banda de pI cercano a 6 coincidiendo con el de las endopeptidasas presentes en frutos de esta misma especie. Estos resultados confirman la presencia de endopeptidasas en el medio de cultivo.