Análisis del promotor del gen del Receptor tipo B de Endotelina en Xenopus laevis

DAIANA CAPRARO; MERCEDES GUADALUPE GARAY; MANUEL J. AYBAR

Tafi del Valle, Tucumán

Congreso; XXXIX Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2022

Asociación de Biología de Tucumán

La señalización por Endotelinas posee 3 ligandos y 2 receptores (Ednra y Ednrb), ambos son proteínas integrales de membrana acoplados a proteína G. La eliminación de la función del gen que codifica el Receptor B (endrb) en ratones produjo fenotipos que sugieren un rol relevante en el desarrollo de derivados de la cresta neural (CN). Mediante hibridación in situ (HIS) en embriones de Xenopus laevis encontramos que este gen se expresa en células premigratorias y migratorias de CN, inicialmente a partir de neurula tardía (Est. 23) en el lado dorsal del tubo neural. En Est. 27 se expresa en el mesencéfalo dorsal y en células de CN en migración en la región troncal de los embriones. Con el objetivo de evaluar la regulación de la expresión de ednrb se identificó el promotor del gen en una región de 3000 pb antes del inicio de la transcripción. Se llevó a cabo el clonado molecular por PCR, en tres fragmentos de 1 Kb que se secuenciaron y se insertaron en un plásmido pCS2+ con GFP como gen reportero. Se inyectaron embriones de Xenopus laevis con este constructo, se cultivaron, y se analizó por microscopía de fluorescencia la expresión en diferentes estadios de desarrollaron. Se observó la expresión en áreas coincidentes con el patrón de ednrb detectado mediante HIS, sin embargo, los fragmentos analizados por separado no logran recapitular totalmente el patrón de expresión de ednrb. Además, se realizó un análisis in silico de las regiones promotoras para identificar sitios putativos de unión a factores de transcripción. Los análisis informáticos revelaron que en las secuencias existen sitios de unión a factores de transcripción relacionados a la CN que podrían estar definiendo las características espacio-temporales de la expresión de este gen.