Factores proteícos secretados por células epiteliales mamarias: Efecto sobre la cascada de señalización para la producción de lípidos

CALZADILLA P. ; COSENTINO S.; CALVO J.C.; GUERRA L.N.

Mar del Plata

Congreso; LV Reunión Científica Anual, Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); Reunión Científica Anual 2010, Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); XLII Reunión Científica Anual, Sociedad Argentina de Farmacología Experimental (SAFE); 2010

SAIC, SAFIS, SAFE

La diferenciación de los pre-adipocitos es regulada por distintos factores de transcripción (FT) como C/EBPβ, C/EBPδ y PPARγ que llevan a la acumulación de triglicéridos (Tg). Se purificó y caracterizó un factor proteico (TgIF) secretado por células mamarias murinas (NMMG) que inhibe la acumulación de lípidos en adipocitos de ratón (cultivos primarios y línea 3T3-L1); utilizando MALDI se demostró que TgIF seria la enzima galactosa 3- O – sulfotransferasa (GST). Dado que la purificación no ha sido a homogeneidad; se evaluó el efecto del TgIF purificado sobre la expresión de los FT mencionados en 3T3-L1, y el efecto de la GST recombinante obtenida por transfección de celulas BHK21 que no producen TgIF. Los preadipocitos se diferenciaron a adipocitos (utilizando 3-isobutyl-1-methyl xanthina, dexamethasona e insulina) en presencia o ausencia de TgIF. Se realizó un estudio temporal (6 días) de la expresión de FT durante la diferenciación en: células control no diferenciada (CC), células diferenciadas (CD) y células diferenciadas tratadas con TgIF (CDF). La expresión de FT se relativizó por actina y por CC. La expresión de todos los FT disminuyó en presencia de TgIF; con máximo de inhibición al día 2 para C/EBPβ, (CD: 9.38 + 1.19 UA vs CDF: 3.04 + 0.11 UA, p<0.01) y C/EBPδ (CD: 13.09 UA + 2.39 vs CDF: 5.19 + 2.02 UA, p< 0.01), y máxima inhibición al día 6 para PPARγ (CD: 2.95 + 0.32 UA vs CDF: 0.61 + 0.37 UA, p<0.01). La enzima GST clonada en pSVK 3 (cedida por K Honke) se amplificó en bacterias JM utilizando como marcador de selección ampicilina, se confirmó la transformación mediante digestión con enzimas de restricción. Se demostró que el TgIF purificado modifica la expresión de los FT responsables de la acumulación de Tg, sugiriendo que esta enzima actuaría de forma secundaria sobre la cascada de señalización para la producción de lípidos. El estudio de la inhibición de la acumulación de Tg por la enzima recombinante esta en proceso en el laboratorio Se realizó un estudio temporal (6 días) de la expresión de FT durante la diferenciación en: células control no diferenciada (CC), células diferenciadas (CD) y células diferenciadas tratadas con TgIF (CDF). La expresión de FT se relativizó por actina y por CC. La expresión de todos los FT disminuyó en presencia de TgIF; con máximo de inhibición al día 2 para C/EBPβ, (CD: 9.38 + 1.19 UA vs CDF: 3.04 + 0.11 UA, p<0.01) y C/EBPδ (CD: 13.09 UA + 2.39 vs CDF: 5.19 + 2.02 UA, p< 0.01), y máxima inhibición al día 6 para PPARγ (CD: 2.95 + 0.32 UA vs CDF: 0.61 + 0.37 UA, p<0.01). La enzima GST clonada en pSVK 3 (cedida por K Honke) se amplificó en bacterias JM utilizando como marcador de selección ampicilina, se confirmó la transformación mediante digestión con enzimas de restricción. Se demostró que el TgIF purificado modifica la expresión de los FT responsables de la acumulación de Tg, sugiriendo que esta enzima actuaría de forma secundaria sobre la cascada de señalización para la producción de lípidos. El estudio de la inhibición de la acumulación de Tg por la enzima recombinante esta en proceso en el laboratorio Se demostró que el TgIF purificado modifica la expresión de los FT responsables de la acumulación de Tg, sugiriendo que esta enzima actuaría de forma secundaria sobre la cascada de señalización para la producción de lípidos. El estudio de la inhibición de la acumulación de Tg por la enzima recombinante esta en proceso en el laboratorio