Asparaginasas fúngicas, enzimas con futuro

M. MARTÍNEZ; L. LEVIN; P. BABAY; S. PEREYRA

Buenos Aires

Jornada; TecnoINTI 2022; 2022

INTI

La L-asparaginasa (E.C. 3.5.1.1: L-asparagina amidohidrolasa) es una enzima que cataliza la hidrólisis de L-asparagina en L-aspartato y amonio. Hoy se emplea para el tratamiento de la leucemia linfoblástica aguda, la leucemia mieloblástica aguda y otros tipos de linfomas. Además de su uso farmacológico como anticancerígeno, tiene aplicación en la industria alimenticia para reducir los niveles de acrilamida. Esta sustancia, genotóxica y carcinogénica, se forma por la reacción de la asparagina con los carbohidratos a temperaturas superiores a 120°C durante la elaboración de productos alimenticios como panes, galletas, snacks, cereales, cacao, café, etc. Las L-asparaginasas que se utilizan en el tratamiento de linfomas son de origen bacteriano. Estas enzimas son efectivas, pero producen varias reacciones adversas, ej. reacciones alérgicas. Debido a estos inconvenientes el mercado farmacéutico se encuentra en una constante búsqueda de nuevas fuentes de asparaginasas. El objetivo de este trabajo fue explorar e identificar nuevas cepas fúngicas como fuentes alternativas para la producción de L-asparaginasa. Se realizó una búsqueda bibliográfica en bases de datos para identificar especies de hongos con potencial para producir L-asparaginasas. De acuerdo a la búsqueda realizada se seleccionaron aislamientos de dichas especies depositadas en distintas colecciones, entre ellas BAFCcult (FCEN-UBA) y algunas cepas comerciales y se evaluó su capacidad para producir esta enzima en medio agarizado. Para ello se consideró la reacción de desaminación catalítica que produce la L-asparaginasa convirtiendo la asparagina en ácido aspártico y amoniaco, la detección de algunos de estos productos implica que existe actividad asparaginasa. Se empleó el medio GA compuesto por 10 g de glucosa, 4 g de asparagina, medio basal: MgSO4·7H2O, HK2PO4, H2KPO4, solución de micro y macronutrientes, tiamina y biotina, 20 g de agar por litro de cultivo, pH inicial=6,2. Se agregó 0,009 % azul de bromotimol como indicador de pH (amarillo a pH ácido y azul pH alcalino). La actividad asparaginasa se detectó como un halo azul en la placa amarilla- verdosa. Se determinó la velocidad de crecimiento midiendo el diámetro de colonia a distintos tiempos. Se evaluaron 37 aislamientos de Asco y Basidiomycota. Quince de ellos, aislamientos de Flammulina velutipes, Cladosporium sp. y de diversas especies de Aspergillus, dieron resultados positivos en el ensayo en medio agarizado. En una etapa posterior se propone identificar a los más activos productores de dicha enzima, optimizar las condiciones de cultivo para incrementar los títulos secretados y caracterizar y purificar la enzima.