Caracterización y regulación de la diacilglicerol lipasa en núcleos aislados de cerebelo de rata

GAVEGLIO, V.L.; PASQUARÉ, S. J.; GIUSTO, N. M.

Bahía Blanca

Jornada; II Jornadas de Posgrado del Dpto. Biología, Bioquímica y Farmacia; 2010

Dpto. Biología, Bioquímica y Farmacia, UNS.

Previamente hemos demostrado la existencia de vias metabólicas intranucleares que involucran ls acción de las actividades enzimáticas de lípido fosfato fosfatasas (LPPs), diacilglicerol lipasa (DAGL) y monoacilglicerol lipasa (MAGL). Estas enzimas modulan câmbios en la composición lipídica nuclear, generando segundos mensajeros que actuarían en la señalización intranuclear. El objetivo de este trabajo fue estudiar y caracterizar la actividad de DAGL empleando [3H]diacilglicerol ([3H]DAG) exógeno como sustrato. Además evaluamos su regulación por ácido all-trans  retinoico (RA). Para ello, se realizó la homogenización de cerebelos de ratas adultas (4 meses de edad) para luego mediante un gradiente de sacarosa, aislar los núcleos puros. Se verificó su pureza por microscopía electrónica, tinción con DAPI y enzimas marcadoras. Nuestros resultados demuestran la producción de MAG, la cual se incrementó hasta 50 μg de proteínas, 2 minutos de incubación y 700 μM de sustrato. En este caso formación de MAG se produjo a partir de 150 μM del mismo, sin embargo fue mucho menor (60 μM) al utilizar el DAG generado del PA agregado exógenamente. Además, en los núcleos preincubados con RA (10 μM), agonistas de receptores nucleares RAR/RXR, se observó una disminución significativa del 70%. Estos resultados demuestran la presencia de una enzima implicada en la señalización intranuclear la cual es regulada por RA.