MICROSCOPÍA DE FLUORESCENCIA CONFOCAL MULTIESPECTRAL APLICADA AL ANÁLISIS DE HELMINTIASIS Y ALTERACIONES CITOHEMATOLÓGICAS EN MURCIÉLAGOS CAPTURADOS EN ZONAS URBANAS Y RURALES DE ENTRE RÍOS, ARGENTINA

ULMAN S; PAVÉ R; ETCHART JI; SAAVEDRA S; SCHIERLOH P

La Pampa

Congreso; XIII Jornadas de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria, I Reunión de la Red Latinoamericana de Inmunología Veterinaria.; 2021

Facultad de Veterinaria de la Universidad Nacional de La Pampa

Debido a su particular regulación inmuno-metabólica, los quirópteros pueden albergar asintomáticamente altas cargas virales. Bajo el paradigma Th1/Th2, se ha planteado que coinfecciones helmínticas pueden atenuar la respuesta antiviral, incrementando el riesgo de zoonosis. Para entender mejor el rol ecoepidemiológico de murciélagos no-hematófagos, nuestro objetivo fue introducir nuevas metodologías basadas en microscopía de fluorescencia confocal multimodal para analizar helmintiasis y fenotipo leucocitario. Se realizaron capturas rurales y urbanas de varias especies provenientes de las familias Vespertilionidae (n=10) y Molossidae (n=12). Se colectó sangre y heces antes de la liberación o se conservaron los órganos en 3% formol cuando especímenes seleccionados fueron sacrificados para ser depositados en la colección INALI (n=10). Los frotis de sangre fijada en metanol en campo se tiñeron con azul de Evans (EB)/DAPI. En muestras fecales e intestinales se caracterizaron huevos, larvas y/o adultospor microscopía de fluorescencia previa tinción EB/IP. Las imágenes se adquirieron en 4 modalidades (DIC, intensidad de fluorescencia, FLIM y multiespectral) con un microscopioconfocal LSM880 (Zeiss) empleando el software ZENBlack. Para el análisis automatizado se programaron rutinas en lenguaje Java en entorno ImageJ. Como técnica goldstandard se empleó microscopía óptica convencional. Todos los intestinos analizados (n=10) presentaron helmintiasis(nematodos, trematodos y/o cestodos). En materia fecal no se detectaron huevos. Los leucocitos periféricos y los huevos de nematodes y trematodes hallados in utero pudieron ser clasificados correctamente mediante análisis multivariado no supervisado (componentes principales) empleando como variables valores morfométricos y/o de tiempo de vida media y longitud de onda de autofluorescencia natural. La abundancia de enteroparásitos y su relación concomitante con leucocitos periféricos podrían ser buenos biomarcadores para futuros estudios de poblaciones urbanas y rurales de murciélagos. Para tal fin, se pudo aplicar exitosamente una nueva técnica para tinción hematológica y otra para parásitos intestinales basadas en microscopía de fluorescenciaconfocal multimodal.