ESTUDIO METABOLÓMICO DE CARCINOMA CELULAR RENAL DE CÉLULAS CLARAS EN MODELOS IN VITRO

MARÍA E. KNOTT; MALENA MANZI; MARIO O. SALAZAR; LYDIA I. PURICELLI; MARIA EUGENIA MONGE

Congreso; III CONGRESO ARGENTINO DE ESPECTROMETRÍA DE MASAS; 2016

El Carcinoma Celular Renal de células claras (CCRcc) es el tipo histológico másfrecuente de carcinoma renal. Este tipo de cáncer se ha asociado con la pérdida defuncionalidad del gen supresor tumoral von Hippel-Lindau (VHL),1 que lleva a unaumento en la expresión del Factor Inducible por Hipoxia 1α (HIF1α), incluso encondiciones de normoxia. Como consecuencia, se desencadena una sobreexpresión degenes relacionados con la glucólisis aeróbica. Recientemente, se han descriptoalteraciones metabólicas asociadas al CCR durante la progresión tumoral y lametástasis.2,3Con el objetivo de estudiar los perfiles metabólicos de células CCRcc, se empleóun modelo in vitro de 2 líneas celulares de diferente background genético [786-O (VHL-/-)y Caki-1 (VHL+/+)] y se compararon con el de la línea no tumoral HEK 293. Mediante unestudio metabolómico no dirigido se analizaron los medios condicionados (MC) de cadasistema mediante la técnica de cromatografía líquida de ultra performance acoplada aespectrometría de masas de alta resolución, utilizando un espectrómetro de masas conanalizador de cuadrupolo-tiempo de vuelo. Los MC se obtuvieron por incubación demonocapas de las distintas líneas celulares con el medio de cultivo apropiado durante 12horas y sin suero. Se analizaron 22 réplicas para cada línea celular y, en paralelo, comocontroles, los medios de cultivo correspondientes. Los extractos fueron obtenidos portratamiento de los MC con isopropanol, centrifugación y posterior liofilización delsobrenadante. Las muestras se analizaron por cromatografía en fase reversa utilizandouna columna C18. Los espectros de masas fueron adquiridos en el rango de m/z 50-1200 mediante ionización por electrospray en modo negativo. La matriz de variablesmetabólicas (pares tr-m/z) fue obtenida con el programa Progenesis QI y procesada conel método estadístico no supervisado de análisis de componentes principales, medianteel cual se identificaron 3 poblaciones asociadas a cada uno de los tipos celularesestudiados. Actualmente, se están analizando los datos mediante métodos declasificación supervisados a fin de determinar un panel de variables discriminantes quepermita diferenciar el exometaboloma celular en las líneas estudiadas. La identificaciónde estas variables permitirá generar un mayor conocimiento sobre la biología del CCRccy sobre las vías metabólicas y los procesos bioquímicos alterados en la enfermedad.Referencias:1- Banks, R. E. et al. Cancer Res., 2006, 66, 2000-2011.2- Lin, L. et al. J. Proteome Res. 2011, 10, 1396-1405.3- Hakimi, A. A. et al. Cancer Cell 2016, 29, 104-116.