INVESTIGADORES
KEUNCHKARIAN Sonia
congresos y reuniones científicas
Título:
ENANTIOSEPARACIÓN DE AMINOÁCIDOS N-PROTEGIDOS MEDIANTE HPLC. ESTUDIO DE LAS VARIABLES CROMATOGRÁFICAS.
Autor/es:
SONIA KEUNCHKARIAN, JUAN M. PADRÓ, CECILIA B. CASTELLS
Lugar:
Cartagena de Indias (Colombia)
Reunión:
Congreso; XXIX Congreso Latinoamericano de Química. XVI Congreso Colombiano de Química. VI Congreso Colombiano de Cromatografía.; 2010
Institución organizadora:
Comité Organizador
Resumen:
ENANTIOSEPARACIÓN
DE AMINOÁCIDOS N-PROTEGIDOS MEDIANTE HPLC.
ESTUDIO DE LAS
VARIABLES CROMATOGRÁFICAS.
Sonia Keunchkarian, Juan M. Padró, Cecilia B. Castells
Laboratorio de Separaciones Analíticas. Departamento de Química. Facultad
de Ciencias Exactas. Universidad Nacional de La Plata. 47 y 115.
sonja@quimica.unlp.edu.ar
Palabras
clave: cromatografía, fases estacionarias quirales, aminoácidos N-protegidos.
Introducción. Numerosas sustancias
químicas de interés en diversas áreas son ópticamente activas. En la separación
de estos enantiómeros se emplea usualmente técnicas cromatográficas con fases
estacionarias quirales (FEQs) tanto en cromatografía líquida como en gaseosa.
El objetivo del presente
trabajo fue la resolución de los isómeros ópticos de aminoácidos naturales
derivatizados con un cromóforo mediante HPLC sobre una FEQ basada en el
alcaloide natural quinina y el estudio de las variables cromatográficas que
afectan la retención y enantioselectividad en este sistema.
Metodología. Se sintetizó una FEQ
fijando al alcaloide natural quinina a un soporte silíceo modificado (1). Se
estudió cromatográficamente la FEQ
obtenida empaquetando una columna de cromatografía líquida a alta presión y evaluando
su capacidad de enantio-reconocimiento en el modo de intercambio aniónico (2) hacia
dinitrofenilderivados de aminoácidos (DNP-aas). Se estudió la retención y enantioselectividad
de estos analitos al modificar las variables cromatográficas más importantes: el
pH y la fuerza iónica de la fase móvil, el tipo de modificador orgánico y la temperatura.
Resultados y discusión. Algunos de los resultados obtenidos en el estudio se muestran a
continuación.
1)
Efecto de la temperatura
Fig.
1. Gráficos de vant Hoff para cinco DNP-aas a pH=6,24 (arriba). Dependencia de
la enantioselectividad con 1/T (abajo).
2) Efecto de la fuerza iónica
Fig.
2. Efecto
de la concentración del buffer sobre la retención de DNP-aas a pH= 6,03 y a 40°C.
Conclusiones. Del estudio sistemático de la influencia que las variables
cromatográficas ejercen sobre la retención y enantioselectividad de los DNP-aas
sobre estas FEQs surgen estas conclusiones:
El pH de la fase móvil
afecta el grado de ionización del selector quiral y de los analitos y, en
consecuencia su retención. La enantioselectividad disminuye al disminuir el pH.
El aumento de la
concentración del buffer disminuye la retención de los analitos (evidencia un
mecanismo de intercambio iónico) sin afectar la enantioselectividad.
La enantioselectividad
es mayor cuando se usa metanol como modificador orgánico que cuando se usa
acetonitrilo.
El aumento de la
temperatura (entre 10°C y
40°C) disminuye la retención y
la enantioselectividad (preponderancia de la diferencia de entalpía de
interacción de ambos enantiómeros con la FEQ en el mecanismo de enantioreconocimiento).
Bibliografía.
1. Veigl, E.; Lindner,
W. (1994). Epimeric N-substituted L-proline derivatives as chiral selectors for
ligand-exchange chromatography. J. Chromatogr. A. 660: 255-268.
2. Keunchkarian, S.; Nardillo,
A. M.; Padró, J.M., Castells, C.B. (2008). Enantioseparación mediante HPLC de
aminoácidos N-protegidos sobre una fase estacionaria quiral constituida por un
intercambiador aniónico basado en quinina. XXVII Congreso Argentino de
Química. San Miguel de Tucumán,
17-19 de setiembre 2008, 1-057.