NUEVO ABORDAJE DE SCREENING Y CUANTIFICACIÓN DE MUTACIONES EN EL DOMINO KINASA DEL ABL EN PACIENTES CON LEUCEMIA MIELOIDE CRÓNICA (LMC) RESISTENTES A LOS INHIBIDORES DE TIROSINA KINASA (ITK)

FERRI C; BIANCHINI M; BELLI C; ICARDI G; GONZÁLEZ M; NORIEGA F; BENGIÓ R; LARRIPA I

Congreso; SAH; 2011

El tratamiento de la LMC se basa en el uso de ITKs; a pesar de su gran efectividad, existen pacientes que desarrollan resistencia o bien son refractarios al mismo. Nuestros datos indican que, en un 30% de los casos, la resistencia se debe a la presencia de mutaciones en el dominio tirosina kinasa del ABL. La detección temprana y monitoreo cuantitativo del clon mutado, representa una herramienta de gran relevancia clínica. Por ello, el screening de mutaciones por High Resolution Melting (HRM) en el ATP binding, P-loop y Catalytic Domain y posterior confirmación y cuantificación del clon mutado con Amplification Refractory Mutation System (ARMS), permitiría detectar con alta sensibilidad la presencia de mutaciones clínicamente relevantes no detectadas por secuenciación directa (SeD). Con el propósito de validar estos métodos, se seleccionaron 15 pacientes identificados como mutados por SeD (6 T315I; 2 Y253H, 2 E255K; 1 G250E, 1 E255V, 1 F317L, 1 M351T, 1 F359I,) la concordancia con HRM fue del 100% y la cuantificación por ARMS del clon mutado, en 4 de estos pacientes resultó, como era de esperar, mayor al 30% (36%, 37%, 54% y 57%). Además, se analizaron 15 donantes sanos resultando wild type por ambos métodos. Se seleccionaron 50 pacientes informados como no mutados por SeD, sin embargo por HRM se detectó un 26% (13/50) de casos con un perfil compatible con la presencia de mutaciones: 7 en el ATP binding, 3 en el P-loop y 3 en el Catalytic Domain. Al testearlos por el método ARMS diseñado para 10 mutaciones con sus respectivas variantes, se detectó la mutación T315I en un 57% (4/7), la G250E en un 33% (1/3) y la F359V en un 33% (1/3); la cuantificación de estas mutaciones resultó ser 4%, 8%, 9,6%, 22%, 4,2% y 23% respectivamente. Los 7 casos identificados por HRM y no confirmados por ARMS podrían deberse a mutaciones no consideradas relevantes. Con este abordaje es posible detectar mutaciones por debajo del límite de detección de la SeD. El aumento de la sensibilidad de detección y posterior cuantificación del clon mutado indican que esta metodología sería más conveniente para el seguimiento de pacientes con signos clínico-genético de resistencia a los ITK.