Diferenciación antigénica en células clonogénica (stem) de melanoma humano

M ARIS, AI BRAVO, AP WUNDERLICH, E LEVY, M BIANCHINI, E VON EUW, M BARRIO, M RODRIGUEZ ZUBIETA, J MORDOH

Mar del Plata

Congreso; SAIC; 2007

El modelo de crecimiento y diferenciación aceptado para tejidos normales es el de una pirámide invertida, en cuyo vértice se encuentran las células stem, con capacidad de autorenovación y de generación de una progenie mayoritaria diferenciada. Hay evidencia de que dicho modelo sería extrapolable a los tumores, implicando que sólo la eliminación total de las células stem tumorales (CST) conllevaría la erradicación tumoral. El objetivo de este trabajo fue investigar si los antígenos (Ags) de diferenciación melanocítica MelanA/Mart-1 y gp100, utilizados frecuentemente como inmunógenos en vacunas terapéuticas, se hallan presentes en las CST de melanoma humano. Se utilizaron como modelo dos líneas celulares, MEL-XY1 y Mel-XY3, asimilando operacionalmente las células clonogénicas a las CST. Se aislaron bajo microscopio colonias provenientes de células con capacidad de crecimiento independiente de anclaje en agar blando. El número de colonias desarrolladas es de alrededor del 5% de las células sembradas, lo que descartaría la presencia de factores parácrinos que afecten el crecimiento de las CST. Se estudió la proliferación celular en las colonias mediante un pulso de bromodeoxiuridina e inmunocitoquímica (ICQ), y la expresión de los Ags por ICQ y PCR en tiempo real. Se comprobó que las células proliferantes se ubican preferencialmente en la periferia de las colonias, disminuyendo su proporción al aumentar el tamaño de las mismas. Las colonias expresan los Ags MelanA/Mart-1 y gp100 en forma heterogénea, detectándose colonias con expresión total, parcial o nula de los mismos. Estos resultados sugieren que: i) la expresión de MelanA/Mart-1 y gp100 no bloquea la capacidad clonogénica de las CST de melanoma; ii) existen subpoblaciones de CST que no expresan dichos Ags pero que poseen capacidad proliferativa. Estos hallazgos poseen profundas implicancias para la comprensión de los mecanismos de diferenciación e inmunoterapia en melanoma humano.