GEN MDR-1 Y RESISTENCIA AL IMATINIB EN CELULAS K562

LARDO M, LAZAROWSKI A, CUELLO MT, GARGALLO P, BIANCHINI M, LARRIPA I

Cordoba (Argentina)

Congreso; Congreso Argentino de Hematología; 2005

El tratamiento de la Leucemia Mieloide Crónica (LMC) con Imatinib puede fracasar por mutaciones en el dominio tirosina quinasa o amplificación del gen BCR/ABL. Otros mecanismos de refractariedad pueden deberse a los genes de resistencia múltiple a drogas (MDR). Objetivo: Investigar en la línea celular K562 (LMC resistente al Imatinib), la expresión del gen MDR1 y los efectos de su inhibición con Ciclosporina A (CyA). Métodos. Se sintetizó c-DNA por retranscripción del RNA total y se amplificaron por RT-PCR los genes BCR/ABL y MDR1 con primers específicos. Se verificó la expresión de la glicoproteína P-gp (producto del gen MDR1) por inmunohistoquímica con 2 anticuerpos monoclonales (C-494 y C219). Las células K562 fueron enfrentadas (24hs) con Imatinib (2uM), CyA (3,0ug/ml), Imatinib+CyA. Se evaluaron apoptosis con naranja de acridina/bromuro de etidio (microscopía de fluorescencia) y función farmacorresistente de P-gp con Rhodamina-123 (citometría de flujo). Resultados: La expresión del gen MDR1 se confirmó tanto por RT-PCR como por inmunhistoquímica. La prueba funcional con Rhodamina-123 indico que la P-gp fue inhibida por CyA o hipotermia. El tratamiento con Imatinib+CyA triplicó el porcentaje de apoptosis comparado con Imatinib solo. Conclusión: El gen MDR1 jugaría un rol adicional en la resistencia al Imatinib. La CyA u otros inhibidores de la P-gp, facilitaría la acción del Imatinib, induciendo mayor porcentaje de apoptosis en células BCR/ABL positivas.