Utilidad de la aplicación de las técnicas moleculares FISH y qRT-PCR para determinar la sobreexpresión del transcripto BCR-ABL en leucemia mieloide crónica

BIANCHINI M, P GARGALLO, F ALÚ, R BENGIÓ, C DE BRASI, I LARRIPA

San Luis (Argentina)

Congreso; SOCIEDAD ARGENTINA DE GENETICA; 2006

La leucemia mieloide crónica (LMC) es un síndrome mieloproliferativo crónico caracterizado por la presencia del cromosoma Filadelfia [t(9;22)(q34;q11)] que da lugar a la formación de un gen híbrido, BCR-ABL, el cual desempeña un papel fundamental en la patogénesis de la enfermedad. El diagnóstico de LMC se establece habitualmente tras la detección del cromosoma Ph, presente en más del 95% de los pacientes. La hibridación in situ (FISH) en núcleos interfásicos, constituye un método de suma importancia para evaluar el porcentaje de las células Ph positivas. En los últimos años se han producido importantes avances en el tratamiento de la LMC, entre los que se destaca un inhibidor especifico de la proteína BCR-ABL, el imatinib (Glivec, Novartis). Este resultó efectivo como terapia de primera línea en pacientes con LMC. Sin embargo, no todos los enfermos con LMC responden a este tratamiento. La resistencia clínica después de la administración regular del imatinib obedece a múltiples causas; entre ellas las más frecuentes son las mutaciones en el dominio quinasa, la amplificación y la sobreexpresión del gen BCR-ABL. Sin embargo, la disminción del clon neoplasico por debajo del nivel de detección citogenético y FISH limita la utilidad de estas técnicas. Por lo tanto, considerando además que el método de qRT-PCR (PCR cuantitativa en tiempo real) es el más sensible para la detección de bajos números de transcriptos, y que la transcripción del BCR-ABL es clave para el crecimiento de las células leucémicas, este método molecular es altamente informativo y necesario en el monitoreo de pacientes que alcanzen la remisión citogenética completa. En el presente trabajo, se presentan los datos obtenidos durante la cuantificaciòn del clon neoplasico BCR-ABL ya sea mediante qRT-PCR y FISH en un grupo de 59 pacientes tratados con imatinib. El objetivo es diseñar un método para determinar sobreexpresión de transcriptos BCR-ABL en pacientes resistentes correlacionando las metodologías de FISH y qRT-PCR y poder caracterizar la sobreexpresion.