FIJACION DE TEJIDOS PARA DIAGNOSTICO MOLECULAR

TRINCHERO A, BIANCHINI M, SORIN I, WEINBERG R, LEVY E, MORDOH J, BRAVO A

Buenos Aires (Argentina)

Congreso; Sociedad Argentina de Patologia; 2006

El desarrollo tecnológico y la aplicación de técnicas moleculares al diagnóstico , obligan a utilizar en un laboratorio de Patología , fijadores no rutinarios que permitan preservar el material genómicoy proteico para el estudio molecular. Determinar la metodología de fijación de tejidos que permita preservar el material genómicopara diagnóstico por método de CISH (Chromogenic in situ hybridization) y RT-PCR en cortes convencionales y/o por Microdisección Laser (MDL). Se estudiaron carcinomas de colon (n=2), carcinomas de mama (n=10) y melanomas (n=2) . Cada tumor fresco se cortóen varios fragmentos los cuales se conservaron de la siguiente manera : 1) formol 24hs ; 2) RNALater(Ambion) + formol 24hs ; 3) congelados -80ºC, incluidos en OCT y luego fijados en acetona o metacarn. MDL: Se realizó en microscopio Leica AS LMD. Los Cortes Laser(CL) de carcinomas de mama, colon y melanomas se recolectaron en buffer de extracción para RNA (RNAqueousMicro Kit, Ambion). El RNA extraído fue cuantificado con un spectofotómetro. Los controles usados en RT-PCR fueron B2microglobulina y GAPDH. CISH: Se realizó sobre cortes de parafina de carcinomas de mama conservados en RNALater + formol 24hs y de tacos de archivo . Se determina HER/2 con sistema ZymedSPOT-LightHER/2CISH kit, la desnaturalización e hibridación se realizaron en forma automatizada en Hybridizer (DAKO Cytomation).