LA INTERNALIZACION DEL TCR EN LINFOCITOS CD8+ MART-1 ESPECIFICOS AUMENTA CON LA CONCENTRACION DE TETRAMEROS DE MHC

FURMAN D, VON EUW E, LEVY E, BARRIO MM, BIANCHINI M, MORDOH J

Mar del Plata

Congreso; SOC.ARG. DE INV. CLINICA; 2006

La función efectora de linfocitos T citotóxicos (CTL) depende de la interacción del receptor T (TCR) con complejos péptido-MHC (pMHC) en la célula blanco y puede ser modulada por la internalización del TCR. Se ha sugerido que células tumorales o infectadas con virus pueden escapar al ataque inmune por selección de variantes con baja o nula expresión de moléculas MHC. El objetivo del presente trabajo es estudiar la velocidad de internalización del TCR (viTCR) en respuesta a distintas concentraciones de tetrámeros MHC (tMHC) (ligando) y determinar si la unión del ligando induce una respuesta efectora en forma dosis-dependiente. Se utilizó un clon de linfocitos CD8+ específicos para MART-1 (AAGIGILTV) restrictos para HLA A-0201 que fueron incubados con distintas concentraciones de tMHC, y se midió la fluorescencia (MFI) en el tiempo (0 - 120 minutos) por citometría de flujo. Con el objeto de estimar el número de receptores ocupados, se utilizaron microesferas marcadas con cantidades conocidas de ficoeritrina (PE, QuantiBRITES™, BD). Para determinar el efecto de la unión de distintas concentraciones del ligando tMHC al TCR sobre la función efectora de los CTL, se midió la producción de IFN-g por ELISA. Además, las células fueron observadas por microscopía confocal para determinar la ubicación subcelular del TCR luego de su internalización. Se observó que a una concentración saturante de tMHC (12μg/ml) correspondiente a una ocupación inicial estimada de ~100.000 TCR/célula, la viTCR es de ~380 TCR min-1, mientras que a concentraciones sub-saturantes de tMHC, la viTCR disminuye en forma logarítmica. Se detectó producción de IFN- g  dosis-dependiente a partir de una ocupación de ~360 TCR/célula. Nuestros resultados indican que la tasa de internalización del TCR puede ser modulada por el número de complejos pMHC, lo que sugiere que la velocidad de la respuesta T citotóxica depende de la densidad de complejos pMHC en las células blanco. Estudios posteriores permitirán dilucidar el destino del TCR en distintas condiciones del ligando en el contexto celular y su implicancia en la respuesta T.