Celulas dendriticas humanas cargadas con celulas de melanoma apoptoticas efectuan eficientemente presentación cruzada de antigenos especificos a linfocitos T citotoxicos

ERIKA M VON EUW, M MARCELA BARRIO, ESTRELLA M LEVY, DAVID FURMAN, MICHELE BIANCHINI, JOSÉ MORDOH

Mar del Plata (Argentina)

Congreso; SOC.ARG. DE INV. CLINICA; 2006

Resultados previos de nuestro laboratorio en melanoma murino B16 demostraron que la vacunación con células dendríticas (CDs) cargadas con células tumorales (CT) apoptóticas inducía protección duradera contra un desafío con CT vivas. En al presente trabajo in vitro, utilizando CDs inmaduras humanas y una mezcla de líneas celulares de melanoma humano  apoptóticas  (APO), analizamos la fagcitosis, maduración y presentación antigénica. A partir de monocitos de sangre periférica de dado­res sanos se obtuvieron CDs inmaduras (CD1a+/CD11c+./CD14-) incubando con IL-4 (50 ng/ml) y GM-CSF (800 UI/mI). La apoptosis de las CT fue inducida por radlación gama (70Gy), observandóse por FACS 40 +- 10% Anexina V ·FlTC. y 12 +- 4.5% Anexina V - FITC+ Ioduro de Propidio+. Tras cocultivar CDs y APO marcadas previamente con PKH26 y PKH6, analizamos la cinética de fagocitosis por FACS Y mincroscopía  electrónica. Se observó ya a las 6 hs post incubación que las CDs inmaduras fagocitan APO, con un máximo de 55 +- 10,5% a las 48hs. La fagocitosis indujo maduración de las CDs según: i) disminución de la endocitosis de Dextrano-FITC (CDs inmaduras 81 +- 5%; CD/APO 33 +- 12%): .ii) expresión aumentada de CD80, CD86, CD83, CD40, CCR7, HLA-I y HLA-II, comparable a la inducida por LPS iii) aumento de la migración de las CD/APO en respuesta a MIP3-ß (ensayo en cámara  modificada de Boyden). Los cocultivos CDs HLA-­A0201/APO indujeron a partir de 6hrs de coincubación la secreción de INFg (> 600 pg/ml) por un clon de Linfocitos T CD8+ específico para el péptido AAGIGILTV del antígeno MelanA/Mart-1, evidenciando presentación antigénica cruzada luego de la fagocitosis de APO.