ROL DE LA ACUAPORINA 2 EN LA REGULACION DE VOLUMEN CELULAR

FORD PAULA; RIVAROLA VALERIA; CHARA OSVALDO; PARISI MARIO; CAPURRO CLAUDIA

Mar del Plata, Argentina

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

SAB - SAIC -SAI - SAF - SAFE - SAN

298.   (7310) ROL DE LA ACUAPORINA 2 EN LA REGULACION DE VOLUMEN CELULAR. FORD, PAULA; RIVAROLA, VALERIA; CHARA, OSVALDO; PARISI, MARIO; CAPURRO, CLAUDIA Lab. de Biomembranas, Dpto. de Fisiologia y Biofisica, Facultad de Medicina, (DBA) Las celulas de los tubulos colectores (TC) del rinon de ma-mffero estan expuestas a un amplio rango de la osmoiaridad extracelular y requieren de importantes mecanismos de regula-cion de volumen para mantener la homeostasis intracelular. La permeabilidad al agua de estas celulas es regulada por la hor-mona antidiuretica. Esta hormona induce la incorporacion de canales especi'ficos para el transporte de agua (acuaporina 2: AQP2) en la membrana apical de ias celulas principales del TC. Ei objetivo de este trabaio fue investigar, en presencia de dife-rentes gradientes osmoticos, la activacion de mecanismos de regulacibn de volumen, en celulas de TC y ei posible rol de la AQP2 en estos procesos. Para ello utilizamos dos lineas celula-res derivadas del TC cortical de rata: una de ellas no expresa acuaporinas (WT-RCCD1) y la oira transfectada en forma esta-ble con la AQP2 (AQP2-RCCD1). Los resuitados de inmuno-lacalizacion muestran que la AQP2 se expresa constitutivamente en la membrana apical. Para la medicion del voiumen celular utiiizamos una :ecnica de microscopfa de fiuorescencia la cuai nermite registrar en forma simuitanea voiumen y pH en celulas crecidas formando nonocapas. Experimentos con medio hipertonico demostraron que independientemente de la expresion de la AQP2 las celulas RCCD1 no desarrollan un mecanismo de regulacion del volumen. Por el contrario al someter las celulas a un gradiente hipotonico se desencadenan mecanismos de regu-iacion del volumen en ambas Imeas celulares. Sin embargo, el tiempo que tardan en alcanzar el maximo volumen y ia latencia antes de comenzar la regulacion es significativamente menor en las celulas que expresan AQP2 (p<0.001). Esta respuesta reguladora ocurre en paralelo con una acidificacion intracelular la cual es mas rapida en AQP2-RCCD1 (p<0.05). Estos resuita-dos sugieren que la expresion de AQP2 es fundamental para una rapida activacion de los mecanismos de regulacion de volumen. de la AQP2 las celulas RCCD1 no desarrollan un mecanismo de regulacion del volumen. Por el contrario al someter las celulas a un gradiente hipotonico se desencadenan mecanismos de regu-iacion del volumen en ambas Imeas celulares. Sin embargo, el tiempo que tardan en alcanzar el maximo volumen y ia latencia antes de comenzar la regulacion es significativamente menor en las celulas que expresan AQP2 (p<0.001). Esta respuesta reguladora ocurre en paralelo con una acidificacion intracelular la cual es mas rapida en AQP2-RCCD1 (p<0.05). Estos resuita-dos sugieren que la expresion de AQP2 es fundamental para una rapida activacion de los mecanismos de regulacion de volumen.