INVESTIGADORES
RAJAL veronica Beatriz
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización Genética de Cepas aisladas de suelos con Boro
Autor/es:
NORMA MORAGA; HUGO R. POMA; HÉCTOR A. CRISTÓBAL; MARÍA J. AMOROSO; VERÓNICA B. RAJAL
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología; 2010
Resumen:
Introducción:
La provincia de Salta encabeza a nivel nacional la exportación de
minerales de boro y sus derivados. Como muchas otras explotaciones mineras
genera problemas puntuales de contaminación. La biorremediación se plantea como
una alternativa moderna para solucionar problemas ambientales. Es por ello y
por ser productores de antibióticos, que los Actinomycetes, en particular el género de los Streptomyces, han sido ampliamente estudiados. Esto y la necesidad
de patentar generaron un establecimiento descontrolado de nuevas especies, por lo
que resultó imperioso establecer criterios estándares de clasificación. Williams
y col. realizaron una extensa investigación fenética en cepas de cultivo que
permitió agrupar las cepas de Streptomyces
en diferentes clusters detallados en el Manual de Sistemática Bacteriológica de
Bergey. Los grupos generados empleando el análisis de secuencias de ADNr 16S se
corresponden satisfactoriamente con los grupos fenotípicos definidos por
Williams
Objetivos: A partir de las secuencias del ADNr 16S obtenido de 9 cepas de Actinomycetes
aisladas de suelos contaminados con Boro se plantearon:
Identificar
las especies y ubicarlas taxonómicamente en la clasificación existente
para miembros del grupo Actinomycetae.
Realizar un
análisis filogenético.
Materiales y Métodos:
En trabajos previos se realizaron diferentes ensayos a partir de los
cuales se seleccionaron las cepas Gram Positivas que presentaron mayor
tolerancia a Boro para su caracterización genética. El ADN de las mismas se
extrajo usando un kit comercial, realizando algunas variaciones en el protocolo
provisto por el fabricante. Se amplificó con primers universales diseñados por
Brosius y col. usando un termociclador.
Se detectaron los productos de PCR por electroforesis en gel de agarosa al 2%. Las
dos cadenas de los fragmentos de ADN amplificados fueron secuenciadas
(MACROGEN® Korea) y las secuencias obtenidas se editaron con el programa
Chromas Lite versión 2 y se subieron a la base de datos GeneBank®.
A partir de los fragmentos secuenciados y de secuencias pertenecientes
a la misma especie o estrechamente relacionadas en el GeneBank®, se realizó el
alineamiento y análisis filogenético utilizando el programa MEGA version 4.
Para la construcción del árbol filogenético se empleó el método de
Neighboring-Joining con la distancia de Kimura.
Resultados:
Mediante el análisis filogenético se determinó la posición taxonómica
de los organismos aislados dentro del marco provisto por la clasificación establecida
por Williams. En la tabla se detallan los organismos que presentaron mayor
homología con los aislamientos realizados.
Cepa
Especie
con mayor homología
% Homología
Cluster
según Williams
002
S. iakyrus
100
12
048
S. achromogenes
99,4
19
128
S. lincolnensis
99,8
19
050
S. fradie
99,7
68
051
S. ambofaciens
99,8
23
053
S. albogriseolus
99,9
12
130
S. polychromogenes
99,8
61
133
Streptomyces sp.
98,2
?
132
Lentzea sp.
99,2
?
Conclusiones: Se identificaron los distintos aislamientos: 8 Streptomyces y uno del género
Lentzea (Actinomycetae) La cepa 133 es
la que posee menor homología y no tiene asignada especie. Las especies identificadas
se ubicaron taxonómicamente en la clasificación existente para miembros del
grupo