Resistencia a la bilis de cepas de Bifidobacterium de origen humano.

KOCIUBINSKI G.; PÉREZ P.; LÓPEZ GARCÍA S.; SEQUEIROS C.; AÑÓN M.C. Y DE ANTONI G.

Bs. As., Argentina

Congreso; VII Congreso Argentino de Microbiología; 1995

·  Uno de los requisitos que debe cumplir un microorganismo destinado a la elaboración de probióticos es el ser resistente a las sales biliares.   Las bacterias del género Bifidobacterium son habitantes naturales del intestino del hombre y diferentes animales con lo cual es de esperar que sean resistentes a la acción bactericida que presentan los ácidos biliares conjugados y desconjugados. En vista de ello, consideramos de suma importancia contar con un método simple que nos permita realizar el relevamiento de un gran número de cepas para seleccionar aquellas más resistentes, a los efectos de incluirlas en la elaboración de prebióticos. ·  El objetivo de este trabajo fue estudiar la resistencia a la bilis de diferentes cepas del género Bifidobacterium de origen humano utilizando diferentes ensayos “in vitro”, y comparar los resultados obtenidos con cada uno de ellos. ·  Las cepas de Bifidobacterium fueron aisladas a partir de materia fecal de lactantes sanos.   La resistencia a la bilis de diferentes cepas se estudió a traves de diferentes ensayos “in vitro”:   i-Ensayo de lisis: cultivos de los microorganismos en medio TPY fueron centrifugados (9800g/10 min) y resuspendidos en buffer fosfato 50 mM (pH 7). Sobre esta suspensión celular se adicionó la suspensión de bilis a diferentes concentraciones, y se midió la DO a 550 nm a diferentes tiempos como índice de la lisis celular.   ii- Ensayo ecométrico: se realizó el método ecométrico utilizando como medio sólido TPY con bilis al 1%. Las placas fueron incubadas (48 h/37ºC), y se comparó el desarrollo frente al observado en el mismo medio sin bilis. iii- Ensayo de supervivencia: suspensiones de los microorganismos en medio TPY adicionado de bilis al 1% fueron tomadas a distintos tiempos durante 1 hora, y se esparcieron sobre medio sólido sin bilis. Las placas se incubaron 48h/37ºC y se observó el tiempo en el que hay muerte celular, comparándolo frente al desarrollo de una suspensión de los microorganismos sin bilis. ·  Los resultados obtenidos fueron los siguientes: -         El ensayo de lisis mostró que no hay efecto lítico hasta concentraciones de 3% de bilis luego de 24 h a 37 ºC en ninguna de las cepas estudiadas. -         Por otro lado los ensayos ecométrico y de supervivencia mostraron resultados diferentes. En ambos la única cepa que demostró ser resistente a la bilis al 1% fue la 531, mientras que las demás (cepas 538, 5310, 5314, 5317, mb-9 y mb-56) resultaron ser sensibles a dicho agente. En el caso de la cepa mb-2 se obtuvo resultados contrapuestos, demostrando ser sensible en el ensayo ecométrico mientras que desarrolló normalmente en el de supervivencia. ·  En base a los resultados obtenidos podemos concluir que la resistencia a la bilis por parte de las bacterias  del género Bifidobacterium es función no solo de la cepa estudiada sino también del ensayo empleado.   Podemos concluir que a pesar de ser todas las cepas estudiadas de origen intestinal, la resistencia a la bilis es una propiedad de cada cepa encontrándose entre ellas algunas muy resistentes y que podrían ser utilizadas en la elaboración de prebióticos.   Además observamos que para una cepa determinada, los resultados dependen de la metodología utilizada. Esto podría deberse al diferente entorno fisicoquímico al que son sometidos los microorganismos, siendo este un factor determinante de la resistencia o la sensibilidad.