INVESTIGADORES
VIGLIANO Fabricio Andres
congresos y reuniones científicas
Título:
Análisis cuantitativo de neuromoduladores de la ingesta en larvas triploides de Rhamdia quelen y sus variaciones en un esquema de ayuno realimentación
Autor/es:
GUARAGNA, G.; MASCAMBRONI, M.B.; MENDÍA, A.C.; BOAGLIO, A.C.; MUÑOZ, L.; VIGLIANO, F.A.
Lugar:
Zavalla-Casilda
Reunión:
Jornada; XX Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas, Facultad de Ciencias Veterinarias. VII Jornada Latinoamericana. V Jornadas de Ciencia y Tecnología, Facultad de Ciencias Agrarias. IV Reunión Transdisciplinaria en Ciencias Agropecuarias; 2019
Institución organizadora:
Facultad de Ciencias Agrarias y Facultad de Ciencias Veterinarias, UNR
Resumen:
El bagre <span class="keyword">sspan>udamericano (Rhamdia quelen) e<span class="keyword">sspan> una e<span class="keyword">sspan>pecie ampliamente di<span class="keyword">sspan>tribuida en América del <span class="keyword">sspan>ur. Pre<span class="keyword">sspan>enta hábito<span class="keyword">sspan> omnívoro<span class="keyword">sspan>, rápido crecimiento y <span class="keyword">sspan>u ru<span class="keyword">sspan>ticidad hace que <span class="keyword">sspan>e adapte muy bien a nue<span class="keyword">sspan>tra zona para cultivo<span class="keyword">sspan> inten<span class="keyword">sspan>ivo<span class="keyword">sspan> o <span class="keyword">sspan>emi inten<span class="keyword">sspan>ivo<span class="keyword">sspan>. No ob<span class="keyword">sspan>tante, el rápido crecimiento trae aparejado una pronta madurez <span class="keyword">sspan>exual. E<span class="keyword">sspan>to determina que durante el período reproductivo la<span class="keyword">sspan> re<span class="keyword">sspan>erva<span class="keyword">sspan> energética<span class="keyword">sspan> <span class="keyword">sspan>ean de<span class="keyword">sspan>tinada<span class="keyword">sspan> a la maduración <span class="keyword">sspan>exual en detrimento del crecimiento <span class="keyword">sspan>omático. Actualmente entre la<span class="keyword">sspan> diferente<span class="keyword">sspan> herramienta<span class="keyword">sspan> biotecnológica<span class="keyword">sspan> utilizada<span class="keyword">sspan> para optimizar la producción <span class="keyword">sspan>e de<span class="keyword">sspan>taca la triploidización por choque térmico, que permite la obtención de individuo<span class="keyword">sspan> e<span class="keyword">sspan>térile<span class="keyword">sspan>. Trabajo<span class="keyword">sspan> de nue<span class="keyword">sspan>tro grupo de inve<span class="keyword">sspan>tigación demo<span class="keyword">sspan>traron que lo<span class="keyword">sspan> individuo<span class="keyword">sspan> triploide<span class="keyword">sspan> de R. quelen po<span class="keyword">sspan>een un mayor pe<span class="keyword">sspan>o final de faena y mayor rendimiento de carca<span class="keyword">sspan>a en comparación con <span class="keyword">sspan>u<span class="keyword">sspan> hermano<span class="keyword">sspan> diploide<span class="keyword">sspan>3. Otra técnica muy utilizada e<span class="keyword">sspan> el manejo de período<span class="keyword">sspan> de ayuno y realimentación. A<span class="keyword">sspan>í, en individuo<span class="keyword">sspan> <span class="keyword">sspan>ometido<span class="keyword">sspan> a un período de ayuno, <span class="keyword">sspan>e ob<span class="keyword">sspan>erva un crecimiento acelerado debido a la hiperfagia compen<span class="keyword">sspan>atoria, <span class="keyword">sspan>ínte<span class="keyword">sspan>i<span class="keyword">sspan> proteica y re<span class="keyword">sspan>pue<span class="keyword">sspan>ta<span class="keyword">sspan> hormonale<span class="keyword">sspan> al ree<span class="keyword">sspan>tablecer<span class="keyword">sspan>e la alimentación. Dentro del complejo <span class="keyword">sspan>i<span class="keyword">sspan>tema de control de la alimentación en pece<span class="keyword">sspan>, el <span class="keyword">sspan>i<span class="keyword">sspan>tema neuroendocrino difu<span class="keyword">sspan>o (SNED) cumple importante<span class="keyword">sspan> funcione<span class="keyword">sspan>. El SNED e<span class="keyword">sspan>tá conformado por célula<span class="keyword">sspan> enteroendócrina<span class="keyword">sspan> localizada<span class="keyword">sspan> en la muco<span class="keyword">sspan>a dige<span class="keyword">sspan>tiva que producen y <span class="keyword">sspan>ecretan neuropéptido<span class="keyword">sspan> moduladore<span class="keyword">sspan> de la inge<span class="keyword">sspan>ta. Entre e<span class="keyword">sspan>to<span class="keyword">sspan> de<span class="keyword">sspan>tacan do<span class="keyword">sspan> con funcione<span class="keyword">sspan> antagónica<span class="keyword">sspan>: el neuropéptido Y (NPY) y la coleci<span class="keyword">sspan>toquinina-8 (CCK-8) con funcione<span class="keyword">sspan> orexigénica<span class="keyword">sspan> y anorexigénica<span class="keyword">sspan>, re<span class="keyword">sspan>pectivamente. Ademá<span class="keyword">sspan> de expre<span class="keyword">sspan>ar<span class="keyword">sspan>e en el SNC, ambo<span class="keyword">sspan> <span class="keyword">sspan>e inmunolocalizan en la muco<span class="keyword">sspan>a inte<span class="keyword">sspan>tinal. Teniendo en cuenta que la larvicultura e<span class="keyword">sspan> la etapa de cultivo donde <span class="keyword">sspan>e de<span class="keyword">sspan>arrollan lo<span class="keyword">sspan> órgano<span class="keyword">sspan> relacionado<span class="keyword">sspan> con la inge<span class="keyword">sspan>ta y la<span class="keyword">sspan> célula<span class="keyword">sspan> enteroendócrina<span class="keyword">sspan>, el pre<span class="keyword">sspan>ente trabajo tuvo por objetivo evaluar lo<span class="keyword">sspan> efecto<span class="keyword">sspan> del nivel de ploidía y el ayuno con po<span class="keyword">sspan>terior realimentación en la expre<span class="keyword">sspan>ión de NPY y CCK-8 en célula<span class="keyword">sspan> neuroendocrina<span class="keyword">sspan> inte<span class="keyword">sspan>tinale<span class="keyword">sspan> de larva<span class="keyword">sspan> de R. quelen.La<span class="keyword">sspan> larva<span class="keyword">sspan> diploide<span class="keyword">sspan> y triploide<span class="keyword">sspan> <span class="keyword">sspan>e obtuvieron <span class="keyword">sspan>iguiendo el protocolo experimental de<span class="keyword">sspan>crito por nue<span class="keyword">sspan>tro grupo de trabajo3. A lo<span class="keyword">sspan> 21 día<span class="keyword">sspan> po<span class="keyword">sspan>t-eclo<span class="keyword">sspan>ión, <span class="keyword">sspan>e <span class="keyword">sspan>ometieron larva<span class="keyword">sspan> de ambo<span class="keyword">sspan> grupo<span class="keyword">sspan> (diploide<span class="keyword">sspan> y triploide<span class="keyword">sspan>) a un ayuno de 30 hora<span class="keyword">sspan> de duración. El re<span class="keyword">sspan>to de la<span class="keyword">sspan> larva<span class="keyword">sspan> diploide<span class="keyword">sspan> y triploide<span class="keyword">sspan> fueron alimentada<span class="keyword">sspan> con la frecuencia habitual, <span class="keyword">sspan>irviendo como grupo<span class="keyword">sspan> controle<span class="keyword">sspan> alimentado<span class="keyword">sspan>. Luego de la<span class="keyword">sspan> 30 hora<span class="keyword">sspan> de ayuno <span class="keyword">sspan>e tomaron mue<span class="keyword">sspan>tra<span class="keyword">sspan> de individuo<span class="keyword">sspan> diploide<span class="keyword">sspan> y triploide<span class="keyword">sspan> ayunado<span class="keyword">sspan> (grupo<span class="keyword">sspan> DA0 y TA0) y alimentado<span class="keyword">sspan> (grupo<span class="keyword">sspan> DC y TC). Po<span class="keyword">sspan>teriormente, lo<span class="keyword">sspan> pece<span class="keyword">sspan> fueron realimentado<span class="keyword">sspan> y <span class="keyword">sspan>e tomaron mue<span class="keyword">sspan>tra<span class="keyword">sspan> de larva<span class="keyword">sspan> diploide<span class="keyword">sspan> y triploide<span class="keyword">sspan> tra<span class="keyword">sspan> 1 (grupo<span class="keyword">sspan> DA1 y TA1) y 3 (grupo<span class="keyword">sspan> DA3 y TA3) hora<span class="keyword">sspan>, quedando a<span class="keyword">sspan>í con<span class="keyword">sspan>tituido<span class="keyword">sspan> lo<span class="keyword">sspan> ocho grupo<span class="keyword">sspan> experimentale<span class="keyword">sspan> (Fig. 1). Se mue<span class="keyword">sspan>trearon 15 larva<span class="keyword">sspan> por grupo. La<span class="keyword">sspan> mue<span class="keyword">sspan>tra<span class="keyword">sspan> <span class="keyword">sspan>e proce<span class="keyword">sspan>aron de manera rutinaria para <span class="keyword">sspan>u inclu<span class="keyword">sspan>ión en parafina, y <span class="keyword">sspan>e realizaron corte<span class="keyword">sspan> hi<span class="keyword">sspan>tológico<span class="keyword">sspan>, lo<span class="keyword">sspan> cuale<span class="keyword">sspan> fueron recolectado<span class="keyword">sspan> en portaobjeto<span class="keyword">sspan> <span class="keyword">sspan>ilanizado<span class="keyword">sspan>. Utilizamo<span class="keyword">sspan> una técnica inmunohi<span class="keyword">sspan>toquímica indirecta de acuerdo al protocolo de<span class="keyword">sspan>cripto por nue<span class="keyword">sspan>tro grupo de inve<span class="keyword">sspan>tigación para la e<span class="keyword">sspan>pecie1. Se utilizaron anticuerpo<span class="keyword">sspan> primario<span class="keyword">sspan> policlonale<span class="keyword">sspan> anti-NPY (1:1500; Laboratorio<span class="keyword">sspan> Penín<span class="keyword">sspan>ula, T-4454) y anti-CCK (1:1000; Laboratorio<span class="keyword">sspan> Penín<span class="keyword">sspan>ula, T-4254), y anticuerpo<span class="keyword">sspan> <span class="keyword">sspan>ecundario<span class="keyword">sspan> anti-IgG de conejo conjugado con molécula<span class="keyword">sspan> de dextrano y peroxida<span class="keyword">sspan>a (Immpre<span class="keyword">sspan><span class="keyword">sspan>®, Laboratorio<span class="keyword">sspan> Vector, MP-7801). Una vez obtenido<span class="keyword">sspan> lo<span class="keyword">sspan> corte<span class="keyword">sspan> inmunomarcado<span class="keyword">sspan> y contra<span class="keyword">sspan>tado<span class="keyword">sspan>, <span class="keyword">sspan>e utilizó un fotomicro<span class="keyword">sspan>copio Leica DM750 equipado con una cámara Leica EC3 para obtener 10 imágene<span class="keyword">sspan> de inte<span class="keyword">sspan>tino a<span class="keyword">sspan>cendente por cada larva. Se utilizó el <span class="keyword">sspan>oftware de di<span class="keyword">sspan>tribución gratuita ImageJ (v. 1.52a) para cuantificar la cantidad de célula<span class="keyword">sspan> inmunopo<span class="keyword">sspan>itiva<span class="keyword">sspan> a NPY y CCK por mm-2 de muco<span class="keyword">sspan>a inte<span class="keyword">sspan>tinal. Lo<span class="keyword">sspan> dato<span class="keyword">sspan> <span class="keyword">sspan>e analizaron con te<span class="keyword">sspan>t de ANOVA a do<span class="keyword">sspan> criterio<span class="keyword">sspan> para determinar la interacción entre factore<span class="keyword">sspan> (nivel de ploidía y e<span class="keyword">sspan>tado nutricional). Po<span class="keyword">sspan>teriormente, <span class="keyword">sspan>e evaluaron la<span class="keyword">sspan> diferencia<span class="keyword">sspan> entre ejemplare<span class="keyword">sspan> con di<span class="keyword">sspan>tinto<span class="keyword">sspan> e<span class="keyword">sspan>tatu<span class="keyword">sspan> nutricionale<span class="keyword">sspan> diploide<span class="keyword">sspan> o triploide<span class="keyword">sspan> mediante ANOVA a un criterio de cla<span class="keyword">sspan>ificación con po<span class="keyword">sspan>te<span class="keyword">sspan>t de Tukey. La<span class="keyword">sspan> diferencia<span class="keyword">sspan> entre diploide<span class="keyword">sspan> y triploide<span class="keyword">sspan> de una mi<span class="keyword">sspan>ma condición nutricional <span class="keyword">sspan>e analizaron mediante te<span class="keyword">sspan>t t de <span class="keyword">sspan>tudent. Cuando lo<span class="keyword">sspan> dato<span class="keyword">sspan> no pa<span class="keyword">sspan>aron el te<span class="keyword">sspan>t de normalidad <span class="keyword">sspan>e utilizaron método<span class="keyword">sspan> no paramétrico<span class="keyword">sspan>. Para el análi<span class="keyword">sspan>i<span class="keyword">sspan> <span class="keyword">sspan>e empleó el <span class="keyword">sspan>oftware e<span class="keyword">sspan>tadí<span class="keyword">sspan>tico JMP (v. 5.1.1) con<span class="keyword">sspan>iderando diferencia<span class="keyword">sspan> <span class="keyword">sspan>ignificativa<span class="keyword">sspan> a p < 0,05.Al analizar lo<span class="keyword">sspan> dato<span class="keyword">sspan> con un ANOVA a do<span class="keyword">sspan> criterio<span class="keyword">sspan> la<span class="keyword">sspan> variacione<span class="keyword">sspan> en la inmunorreactividad a CCK-8 en diploide<span class="keyword">sspan> y triploide<span class="keyword">sspan> con di<span class="keyword">sspan>tinta condición alimentaria, <span class="keyword">sspan>e ob<span class="keyword">sspan>ervó interacción entre lo<span class="keyword">sspan> factore<span class="keyword">sspan> ploidía y e<span class="keyword">sspan>tatu<span class="keyword">sspan> nutricional (F3,75 = 13.5, p < 0.0001). La mayor fuente de variación fue la condición de alimentación (37,2%), lo cual e<span class="keyword">sspan> e<span class="keyword">sspan>perable ya que CCK-8 e<span class="keyword">sspan> un modulador de la inge<span class="keyword">sspan>ta. En larva<span class="keyword">sspan> diploide<span class="keyword">sspan> el ayuno di<span class="keyword">sspan>minuyó <span class="keyword">sspan>ignificativamente el número de célula<span class="keyword">sspan> inmunorreactiva<span class="keyword">sspan> (Fig. 2A). La realimentación re<span class="keyword">sspan>tableció lo<span class="keyword">sspan> valore<span class="keyword">sspan>, incrementando <span class="keyword">sspan>ignificativamente luego de 3 hora<span class="keyword">sspan> en comparación con DA0 (Fig. 2A). Por el contrario, en lo<span class="keyword">sspan> triploide<span class="keyword">sspan>, el ayuno no modificó el número de célula<span class="keyword">sspan> inmunorreactiva<span class="keyword">sspan> (Fig. 2B), pero la realimentación determinó un incremento <span class="keyword">sspan>ignificativo luego de la<span class="keyword">sspan> 3 hora<span class="keyword">sspan> (Fig. 2B). E<span class="keyword">sspan>to puede relacionar<span class="keyword">sspan>e con la función de CCK como e<span class="keyword">sspan>timulador de la <span class="keyword">sspan>ecreción de enzima<span class="keyword">sspan> dige<span class="keyword">sspan>tiva<span class="keyword">sspan>, y por <span class="keyword">sspan>u rol como regulador de la <span class="keyword">sspan>aciedad po<span class="keyword">sspan>t inge<span class="keyword">sspan>ta4. Cuando <span class="keyword">sspan>e compararon larva<span class="keyword">sspan> diploide<span class="keyword">sspan> y triploide<span class="keyword">sspan> con un mi<span class="keyword">sspan>mo e<span class="keyword">sspan>tado nutricional, <span class="keyword">sspan>e ob<span class="keyword">sspan>ervó que no exi<span class="keyword">sspan>tieron diferencia<span class="keyword">sspan> <span class="keyword">sspan>ignificativa<span class="keyword">sspan> entre DC y TC o DA0 y TA0. Sin embargo, lo<span class="keyword">sspan> triploide<span class="keyword">sspan> mo<span class="keyword">sspan>traron un incremento <span class="keyword">sspan>ignificativo del número de célula<span class="keyword">sspan> luego de 1 y 3 hora<span class="keyword">sspan> de ofrecido el alimento, revelando un comportamiento diferencial. En el análi<span class="keyword">sspan>i<span class="keyword">sspan> para NPY con un ANOVA a do<span class="keyword">sspan> criterio<span class="keyword">sspan>, <span class="keyword">sspan>e ob<span class="keyword">sspan>ervó una interacción no <span class="keyword">sspan>ignificativa entre ploidía y e<span class="keyword">sspan>tatu<span class="keyword">sspan> alimentario. Por ello, la variable <span class="keyword">sspan>e comportó igual en diploide<span class="keyword">sspan> y triploide<span class="keyword">sspan> pe<span class="keyword">sspan>e a la condición nutricional, aunque <span class="keyword">sspan>i <span class="keyword">sspan>e ob<span class="keyword">sspan>ervó que hay efecto<span class="keyword">sspan> de lo<span class="keyword">sspan> factore<span class="keyword">sspan> ploidía (F1,72 = 4.488, p = 0.0376) y e<span class="keyword">sspan>tatu<span class="keyword">sspan> alimentario (F3,72 = 6.494, p = 0.0006). Al comparar para cada ploidía lo<span class="keyword">sspan> efecto<span class="keyword">sspan> de la condición alimentaria en diploide<span class="keyword">sspan> el ayuno no modificó <span class="keyword">sspan>ignificativamente lo<span class="keyword">sspan> valore<span class="keyword">sspan> de la variable (Fig.3A). Si bien de acuerdo a <span class="keyword">sspan>u función orexigénica era e<span class="keyword">sspan>perable un incremento en la expre<span class="keyword">sspan>ión de NPY en ayunado<span class="keyword">sspan>, lo<span class="keyword">sspan> re<span class="keyword">sspan>ultado<span class="keyword">sspan> publicado<span class="keyword">sspan> revelan que el rol regulador de NPY podría <span class="keyword">sspan>er e<span class="keyword">sspan>pecie e<span class="keyword">sspan>pecífico. A<span class="keyword">sspan>í, lo<span class="keyword">sspan> nivele<span class="keyword">sspan> de expre<span class="keyword">sspan>ión en cerebro de juvenile<span class="keyword">sspan> de bacalao (Gadu<span class="keyword">sspan> morhua), en individuo<span class="keyword">sspan> ayunado<span class="keyword">sspan> durante 7 día<span class="keyword">sspan> no tuvieron diferencia<span class="keyword">sspan> <span class="keyword">sspan>ignificativa<span class="keyword">sspan> con lo<span class="keyword">sspan> nivele<span class="keyword">sspan> medido<span class="keyword">sspan> en individuo<span class="keyword">sspan> no ayunado<span class="keyword">sspan>2. Teniendo en cuenta que exi<span class="keyword">sspan>ten otro<span class="keyword">sspan> órgano<span class="keyword">sspan> que modulan la inge<span class="keyword">sspan>ta, no podemo<span class="keyword">sspan> de<span class="keyword">sspan>cartar que el inte<span class="keyword">sspan>tino cumpla un rol menor en la e<span class="keyword">sspan>timulación del apetito. Por otro lado, en triploide<span class="keyword">sspan> el ayuno no modificó la variable, pero hubo un aumento <span class="keyword">sspan>ignificativo de la mi<span class="keyword">sspan>ma luego de 1 y 3 hora<span class="keyword">sspan> de realimentación (Fig. 3B). Re<span class="keyword">sspan>ultado<span class="keyword">sspan> <span class="keyword">sspan>imilare<span class="keyword">sspan> fueron reportado<span class="keyword">sspan> en <span class="keyword">sspan>almón del Atlántico (Salmo <span class="keyword">sspan>alar) y en larva<span class="keyword">sspan> de fletán del Atlántico (Hippoglo<span class="keyword">sspan><span class="keyword">sspan>u<span class="keyword">sspan> hippoglo<span class="keyword">sspan><span class="keyword">sspan>u<span class="keyword">sspan>). En cuanto al efecto que tuvo la ploidía para cada condición alimentaria, <span class="keyword">sspan>e ob<span class="keyword">sspan>ervó que <span class="keyword">sspan>olo lo<span class="keyword">sspan> diploide<span class="keyword">sspan> ayunado<span class="keyword">sspan> pre<span class="keyword">sspan>entaron diferencia<span class="keyword">sspan> e<span class="keyword">sspan>tadí<span class="keyword">sspan>ticamente <span class="keyword">sspan>ignificativa<span class="keyword">sspan> re<span class="keyword">sspan>pecto a lo<span class="keyword">sspan> triploide<span class="keyword">sspan>.Concluimo<span class="keyword">sspan> que el manejo de la ploidía y la condición alimentaria produce variacione<span class="keyword">sspan> en la expre<span class="keyword">sspan>ión de neuropéptido<span class="keyword">sspan> moduladore<span class="keyword">sspan> de la inge<span class="keyword">sspan>ta NPY y CCK-8 en larva<span class="keyword">sspan> de R. quelen. Nue<span class="keyword">sspan>tro<span class="keyword">sspan> re<span class="keyword">sspan>ultado<span class="keyword">sspan> mue<span class="keyword">sspan>tran por primera vez el efecto de la triploidía en la expre<span class="keyword">sspan>ión de e<span class="keyword">sspan>to<span class="keyword">sspan> neuropéptido<span class="keyword">sspan> en pece<span class="keyword">sspan>.
