Estudo do sistema neuroendócrino gastrointestinal em tilápia (Oreochromis niloticus)

PEREIRA, R.; ARAÚJO, J.; COSTA, L.; PAULINO, R.; MOURAD, N.; RODRIGUES, E.; MORÓN-ALCAIN, E.; VIGLIANO, F.A.; ROSA, P.

Palmas

Congreso; Aquaciência; 2012

Sociedade Brasileira de Aquicultura e Biologia Aquática (AQUABIO)

O <span class="keyword">sspan>i<span class="keyword">sspan>tema neuroendócrino difu<span class="keyword">sspan>o (SNED) compreende vário<span class="keyword">sspan> tipo<span class="keyword">sspan> de célula<span class="keyword">sspan> do trato ga<span class="keyword">sspan>trointe<span class="keyword">sspan>tinal, chamada<span class="keyword">sspan> de célula<span class="keyword">sspan> neuroendócrina<span class="keyword">sspan> (CNE<span class="keyword">sspan>), que produzem e <span class="keyword">sspan>ecretam vário<span class="keyword">sspan> hormônio<span class="keyword">sspan> ga<span class="keyword">sspan>trointe<span class="keyword">sspan>tinai<span class="keyword">sspan>, conhecido<span class="keyword">sspan> como neuropeptídeo<span class="keyword">sspan>. E<span class="keyword">sspan>ta<span class="keyword">sspan> molécula<span class="keyword">sspan> po<span class="keyword">sspan><span class="keyword">sspan>uem diver<span class="keyword">sspan>o<span class="keyword">sspan> efeito<span class="keyword">sspan> <span class="keyword">sspan>obre o comportamento alimentar e o controle da dige<span class="keyword">sspan>tão, e<span class="keyword">sspan>timulando a <span class="keyword">sspan>ecreção de enzima<span class="keyword">sspan> dige<span class="keyword">sspan>tória<span class="keyword">sspan> e de <span class="keyword">sspan>ub<span class="keyword">sspan>tância<span class="keyword">sspan> ácida<span class="keyword">sspan> ou bá<span class="keyword">sspan>ica<span class="keyword">sspan> para promover condiçõe<span class="keyword">sspan> ideai<span class="keyword">sspan> para atividade enzimática. Efeito<span class="keyword">sspan> <span class="keyword">sspan>obre a motilidade ga<span class="keyword">sspan>trointe<span class="keyword">sspan>tinal também <span class="keyword">sspan>ão relacionado<span class="keyword">sspan> a e<span class="keyword">sspan><span class="keyword">sspan>e<span class="keyword">sspan> hormônio<span class="keyword">sspan>. Em peixe<span class="keyword">sspan>, já foram de<span class="keyword">sspan>crito<span class="keyword">sspan> algun<span class="keyword">sspan> neuropeptídeo<span class="keyword">sspan>, homólogo<span class="keyword">sspan> ao<span class="keyword">sspan> encontrado<span class="keyword">sspan> em mamífero<span class="keyword">sspan>, como ga<span class="keyword">sspan>trina (GAS) coleci<span class="keyword">sspan>toquinina (CCK), peptídeo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP), neuropeptídeo Y (NPY), dentre outro<span class="keyword">sspan>. O objetivo de<span class="keyword">sspan>te trabalho foi identificar, utilizando a técnica de imunohi<span class="keyword">sspan>toquímica, célula<span class="keyword">sspan> produtora<span class="keyword">sspan> de GAS, CCK-8, CGRP e NPY no trato ga<span class="keyword">sspan>trointe<span class="keyword">sspan>tinal da tilápia u<span class="keyword">sspan>ando anticorpo<span class="keyword">sspan> de<span class="keyword">sspan>envolvido<span class="keyword">sspan> contra neuropeptídeo<span class="keyword">sspan> de mamífero<span class="keyword">sspan>. Foram utilizado<span class="keyword">sspan> cinco e<span class="keyword">sspan>pécime<span class="keyword">sspan> juveni<span class="keyword">sspan> com pe<span class="keyword">sspan>o médio de 25 g ± 11,3 g. O<span class="keyword">sspan> peixe<span class="keyword">sspan> foram <span class="keyword">sspan>ubmetido<span class="keyword">sspan> a jejum de 24 h, ane<span class="keyword">sspan>te<span class="keyword">sspan>iado<span class="keyword">sspan>, <span class="keyword">sspan>acrificado<span class="keyword">sspan> e por fim, retirada<span class="keyword">sspan> amo<span class="keyword">sspan>tra<span class="keyword">sspan> ao longo de todo tubo dige<span class="keyword">sspan>tório. A<span class="keyword">sspan> amo<span class="keyword">sspan>tra<span class="keyword">sspan> de tecido foram fixada<span class="keyword">sspan> em Bouin por 12 hora<span class="keyword">sspan>, colocada<span class="keyword">sspan> em álcool 70% e proce<span class="keyword">sspan><span class="keyword">sspan>ada<span class="keyword">sspan> <span class="keyword">sspan>egundo método<span class="keyword">sspan> hi<span class="keyword">sspan>tológico<span class="keyword">sspan> de rotina. Para a imunohi<span class="keyword">sspan>toquímica toda<span class="keyword">sspan> a<span class="keyword">sspan> reaçõe<span class="keyword">sspan> foram feita<span class="keyword">sspan> em câmara úmida, e no<span class="keyword">sspan> procedimento<span class="keyword">sspan> de lavagem utilizou-<span class="keyword">sspan>e PBS 0,1 M. O bloqueio da atividade da peroxida<span class="keyword">sspan>e endógena e de ligaçõe<span class="keyword">sspan> ine<span class="keyword">sspan>pecífica<span class="keyword">sspan> foi feito u<span class="keyword">sspan>ando reagente<span class="keyword">sspan> Dako® (DakoCytomation, EUA). A<span class="keyword">sspan> amo<span class="keyword">sspan>tra<span class="keyword">sspan> foram incubada<span class="keyword">sspan> com anticorpo<span class="keyword">sspan> primário<span class="keyword">sspan> policlonai<span class="keyword">sspan> (Bachem, EUA) contra GAS (T-4347), CCK-8 (T-4254), NPY (T-4032) e CGRP (T-4454) de acordo com Vigliano et al. (2011). Po<span class="keyword">sspan>teriomente, lavada<span class="keyword">sspan> em tampão e incubada<span class="keyword">sspan> com anticorpo <span class="keyword">sspan>ecundário anticoelho (DakoCytomation, EUA). Por fim, o<span class="keyword">sspan> corte<span class="keyword">sspan> hi<span class="keyword">sspan>tológico<span class="keyword">sspan> foram revelado<span class="keyword">sspan> pelo método enzimático utilizando 3,3 tetrahidrocloreto diaminobenzidina, DAB, (DakoCytomation, EUA) e contra-corado<span class="keyword">sspan> com hematoxilina de Carazzi. Todo<span class="keyword">sspan> o<span class="keyword">sspan> anticorpo<span class="keyword">sspan> detectaram <span class="keyword">sspan>eu<span class="keyword">sspan> re<span class="keyword">sspan>pectivo<span class="keyword">sspan> neuropeptídeo<span class="keyword">sspan> em CNE<span class="keyword">sspan>. A morfologia da<span class="keyword">sspan> CNE<span class="keyword">sspan> vi<span class="keyword">sspan>ta<span class="keyword">sspan> foi di<span class="keyword">sspan>tinta, <span class="keyword">sspan>endo que no e<span class="keyword">sspan>tômago tiveram formato poliédrico com núcleo arredondado enquanto no inte<span class="keyword">sspan>tino médio e po<span class="keyword">sspan>terior po<span class="keyword">sspan><span class="keyword">sspan>uíam forma triangular com núcleo arredondado ou oval <span class="keyword">sspan>ituado no meio ou na po<span class="keyword">sspan>ição ba<span class="keyword">sspan>al. A tilápia apre<span class="keyword">sspan>entou CNE<span class="keyword">sspan> imunopo<span class="keyword">sspan>itiva<span class="keyword">sspan> a CCK-8 e GAS no epitélio de reve<span class="keyword">sspan>timento e glândula<span class="keyword">sspan> de toda<span class="keyword">sspan> a<span class="keyword">sspan> regiõe<span class="keyword">sspan> amo<span class="keyword">sspan>trada<span class="keyword">sspan> do e<span class="keyword">sspan>tômago: cárdia, corpo, cecal e pilórica. Por outro lado, apena<span class="keyword">sspan> no epitélio do primeiro terço do inte<span class="keyword">sspan>tino médio foram vi<span class="keyword">sspan>ta<span class="keyword">sspan> CNE<span class="keyword">sspan> produtora<span class="keyword">sspan> de<span class="keyword">sspan><span class="keyword">sspan>e<span class="keyword">sspan> neuropeptídeo<span class="keyword">sspan>. E<span class="keyword">sspan>trutura<span class="keyword">sspan> imunorreativa<span class="keyword">sspan> para CGRP foram encontrada<span class="keyword">sspan> na camada mu<span class="keyword">sspan>cular (plexo mioentérico em fibra<span class="keyword">sspan> nervo<span class="keyword">sspan>a<span class="keyword">sspan> e neurônio<span class="keyword">sspan>) ao longo de todo o tubo dige<span class="keyword">sspan>tório, de<span class="keyword">sspan>de e<span class="keyword">sspan>ôfago até final do inte<span class="keyword">sspan>tino po<span class="keyword">sspan>terior. Também <span class="keyword">sspan>ão ob<span class="keyword">sspan>ervada<span class="keyword">sspan> CNE<span class="keyword">sspan> produtora<span class="keyword">sspan> de CGRP di<span class="keyword">sspan>per<span class="keyword">sspan>a<span class="keyword">sspan> no epitélio do e<span class="keyword">sspan>tômago e inte<span class="keyword">sspan>tino. Célula<span class="keyword">sspan> imunopo<span class="keyword">sspan>itiva<span class="keyword">sspan> para NPY foram ob<span class="keyword">sspan>ervada<span class="keyword">sspan> no primeiro terço do inte<span class="keyword">sspan>tino médio di<span class="keyword">sspan>per<span class="keyword">sspan>a<span class="keyword">sspan> no epitélio. Foram ainda ob<span class="keyword">sspan>ervada<span class="keyword">sspan> e<span class="keyword">sspan>trutura<span class="keyword">sspan> po<span class="keyword">sspan>itiva<span class="keyword">sspan> a NPY na camada mu<span class="keyword">sspan>cular no inte<span class="keyword">sspan>tino médio e po<span class="keyword">sspan>terior. E<span class="keyword">sspan>te foi o primeiro e<span class="keyword">sspan>tudo a demon<span class="keyword">sspan>trar o <span class="keyword">sspan>uce<span class="keyword">sspan><span class="keyword">sspan>o na identificação, por imunohi<span class="keyword">sspan>toquímica, de GAS, CCK-8, CGRP e NPY no tratoga<span class="keyword">sspan>trointe<span class="keyword">sspan>tinal de tilápia (Oreochromi<span class="keyword">sspan> niloticu<span class="keyword">sspan>) utilizando anticorpo<span class="keyword">sspan> de<span class="keyword">sspan>envolvido<span class="keyword">sspan> contra neuropeptídeo<span class="keyword">sspan> de mamífero<span class="keyword">sspan> demon<span class="keyword">sspan>trando a reação cruzada exi<span class="keyword">sspan>tente fundamentada na grande con<span class="keyword">sspan>ervação e homologia e<span class="keyword">sspan>trutural de<span class="keyword">sspan><span class="keyword">sspan>a<span class="keyword">sspan> proteína<span class="keyword">sspan>.