Nanovacunas: interacción de arqueosomas con células símil-M

RAUL O. GONZALEZ, DIEGO MENGUAL GOMEZ, RICARDO CORRAL, M.J. MORILLA, PATRICIA PETRAY Y EDER L. ROMERO

La Rural

Jornada; JorFyBI; 2007

Introducción: Los arqueosomas (ARQ) son vesículas preparadas a partir de lípidos polares totales (LPT) de arquebacterias que tienen propiedades únicas, como alta resistencia químico-mecánica y capacidad de actuar como adyuvantes. En ensayos previos hemos demostrado la potente respuesta adyuvante de ARQ administrados por vía subcutánea,  donde se exacerbaron las respuestas inmunes celular, humoral y de memoria con respecto a la alumina. Con el objeto de explorar la capacidad de ARQ para generar adyuvancia por vía oral, en el presente trabajo se comparó su capacidad frente a liposomas para hacer binding y efectuar  transcitosis  en células símil M. Estas últimas son un modelo in vitro de las células M  de las Placas de Peyer, especializadas en la conducción de antígenos al tejido linfoide asociado a mucosas. Materiales y Métodos: A partir de arquebacterias halófilas aisladas de una muestra de suelo de Salinas Chicas (Península de Valdez), se extrajeron los LPT que se utilizaron para preparar ARQ, por hidratación del film lipídico en buffer conteniendo 35mM de piranina y 4.10-8 moles de rhodamina-fosfatidiletanolamina. Las vesículas obtenidas se sonicaron, se sometieron a 5 ciclos de congelación-descongelación y se lavaron por centrifugación. Liposomas de fosfatidilcolina de soja hidrogenada (HSPC):colesterol (1:1, mol:mol) conteniendo piranina y rhodamina, se prepararon del mismo modo. Con el fin de inducir la transformación de células Caco-2 a células símil M, se co-cultivaron células Caco-2 y células Raji en transwells. Los co-cultivos se caracterizaron en su integridad cuantificando el pasaje de Rojo Fenol y en su identidad por la disminución de la expresión de la enzima fosfatasa alcalina. Se determinó la toxicidad de ARQ sobre células Caco-2, en función de la concentración por el método de formación de formazan. El binding y la transcitosis de ARQ y liposomas sobre los co-cultivos se estudio por microscopia confocal y espectroscopia de fluorescencia, en función del tiempo de incubación.  Resultados: En primer lugar se demostró la transformación del cultivo de células Caco-2 a células símil M, mediante la determinación de la enzima fosfatasa alcalina en co-cultivos. Los ARQ no resultaron tóxicos hasta concentraciones de 1 mg/ml sobre células Caco-2. Hallamos que mientras no hubo binding sobre células Caco-2, tanto ARQ como liposomas hicieron binding inespecífico sobre las células símil-M (co-cultivos). Sin embargo, remarcablemente, el binding de ARQ aumentó al aumentar el tiempo de incubación y fue 4 veces mayor que el de liposomas, independientemente del tiempo de incubación. Adicionalmente, hallamos que únicamente los ARQ fueron trascitados por las células símil M, dado que fueron colectados en el medio basal con su estructura intacta. Conclusiones: Dada su capacidad adyuvante per se y su capacidad singular de hacer binding y transitar células símil-M, estos ARQ podrían ser utilizados en una estrategias de nanovacunación oral.