EMPLEO DE CÁSCARA DE MANÍ Y SUS DERIVADOS COMO SOPORTE DE ENZIMAS FÚNGICAS

SERBENT, PILAR; RODRIGUEZ, M. DANIELA; FERMANELLI, CARLA; MAGARIO, IVANA; SAUX, CLARA

General Cabrera

Jornada; XXXVIII Jornada Nacional de Maní; 2023

INTA AER General Cabrera

IntroducciónLa agricultura convencional deja pasivos ambientales a escala global. En reiteradas ocasiones los agroquímicos empleados permanecen en el ambiente demandando soluciones eficientes para su remoción. Además, millones de toneladas de biomasa excedente son generadas anualmente. Los hongos de pudrición blanca (HPB) producen enzimas que pueden ser usadas en el tratamiento de efluentes con residuos de agroquímicos. En estado libre las enzimas presentan inestabilidad y una alternativa para su recuperación catalítica es inmovilizarlas. Como los soportes sintéticos para inmovilización de enzimas son costosos existe un interés en explorar el uso de materiales de bajo valor económico como, por ejemplo, la biomasa excedente de las actividades agrícolas. En Argentina la producción de maní genera, anualmente, un volumen de cáscara de maní (CM) que supera las 250 mil toneladas. El objetivo de este trabajo fue evaluar el uso de CM y su biocarbón (BCM) como soportes de la enzima fúngica lacasa (E).Materiales y MétodosEsta enzima fue obtenida a partir del cultivo (14 días, 28°C) de Phlebia brevispora BAFC 633 en medio líquido compuesto por extracto de malta (1,27% P/V), extracto soluble de maíz (5% V/V) y CuSO4 (0,5 mM). La CM fue lavada con agua destilada, secada en estufa a 105 °C hasta peso constante y molida hasta obtener un tamaño de partícula < 3,35 mm. Para la obtención de biocarbón (BCM), la CM fue sometida a un proceso de pirólisis (500 °C por 10 min, bajo 60 mL min-1 de flujo de nitrógeno). La incubación se realizó a 30°C y 150 rpm incorporando 2 g de soporte en 5 mL de solución de lacasa (concentración 4437 U L-1) en Erlenmeyers de 100 mL. Luego de 10 h se vertió el contenido de los Erlenmeyers en tubos falcon (50 mL) para centrifugación (5 min a 700 rpm). Se desechó el sobrenadante, se añadieron 3 mL de tampón acetato sódico 0,1 M (pH 3,6) a los tubos y se mezcló en un vórtex durante 10 segundos, y luego se centrifugaron a 700 rpm durante 5 minutos. Se transfirieron 0,5 g de soporte húmedo a Erlenmeyers limpios de 100 mL para la determinación de actividad lacasa usando 10 mL de una solución de 2,6-dimetoxifenol (DMP) 5 mM en buffer acetato de sodio 0,1 M (pH 3,6). Los ensayos se realizaron por duplicado. El cambio de la absorbancia se monitoreó por espectrofotometría a 469 nm (ε469 (DMP) = 27,5 mM−1cm−1) a los 3, 5 y 7 minutos de reacción. La actividad enzimática se expresó en unidades enzimáticas por gramo de soporte (U g-1), donde 1 U es equivalente a 1 µM min-1 de reactivo convertido a 30° C. Los datos fueron comparados mediante análisis de la varianza y test de Tukey.ResultadosLos valores de lacasa soportada variaron entre 41,97 y 103,27 U g-1(Tabla 1). Con excepción del tiempo 5 (F = 48,41; p = 0,0200), no se observaron diferencias significativas en los valores promedios de actividad enzimática de lacasa inmovilizada en CM y BCM en las lecturas de 3 (F = 0,16; p=0,7241) y 7 minutos (F = 0,70; p=0,4896).