Obtencion y caracterizacion de Anticuerpos (Acs) recombinantes humanos contra antigenos de T. cruzi

V GRIPPO; KA GOMEZ; L NIBORSKI; MJ LEVIN

Mendoza, Mendoza

Congreso; VII Congreso Argentino de Protooologia y Enfermedades Parasitarias SAP 2005; 2005

Sociedad Argentina de Protozoologia

Pacientes con cardiomiopatia cronica de Chagas (CCCh) presentan Acs dirigidos contra las proteínas ribosomales P de T. cruzi (Acs anti-P) que poseen la propiedad de estimular receptores cardiovasculares. La complejidad de la respuesta humoral anti-P nos llevo a construir una biblioteca combinatorial de Acs de un paciente con CCCh que posee Acs con actividad funcional sobre el receptor M2-ChR. A partir de medula osea se preparo ARN total y se sintetizo el ADNc. Se amplificaron las regiones variables (Vh, Vk y Vlambda) y por overlap-PCR se obtuvieron los fragmentos scFvs. Estos se clonaron en el fagémido pComb3x y se electroporaron en E.coli XL1-Blue. El rastreo de la biblioteca se realizo por phage display contra lisado total de epimastigotes, proteínas ribosomales P2beta y P0 y peptidos derivados de dichas proteinas (R13 y P018). La reactividad de clones especificos anti-T.cruzi y anti-P se evidencio por ELISA y Western Blot. La diversidad de los mismos se analizo por digestion con la enzima de restriccion BstOI y secuenciacion. La mayoria de los clones aislados contra el peptido R13 (extremo C-terminal de la proteina ribosomal P2) tuvieron el mismo perfil de digestion y resultaron ser iguales a un clon aislado contra dicha proteina. Por otro lado, todos los clones anti-P0 y anti-T.cruzi aislados presentaron perfiles totalmente distintos. Ademas, se analizo la distribucion de familias VH entre los clones anti-T.cruzi y anti-P y se comparo con autoanticuerpos anti-P de pacientes lupicos. Este trabajo presenta la primer caracterizacion de Acs recombinantes humanos contra antigenos relevantes de T. cruzi y constituye una herramienta fundamental en el estudio de esta enfermedad.