Análisis estructural y funcional de las proteínas ribosomales P de T. cruzi a través de cristalografía de rayos X y otros métodos: estudios preliminares de plegamiento

JURI AYUB M; GHIO S; GÓMEZ BARROSO A; LEVIN M; AGUILAR C

Viña del Mar. Chile

Congreso; REUNIÓN IBEOAMERICANA DE BIOQUÍMICA, BIOLOGÍA MOLECULAR Y BIOLOGÍA CELULAR; 2000

Las proteínas ribosomales P forman una protuberancia (stalk) ubicada en la subunidad mayor de los ribosomas eucariotas. Esta estructura ha sido involucrada en la translocación durante la síntesis de proteínas e interviene en la actividad de los factores de elongación. Aunque las proteínas del stalk eucariota y procariota parecen tener roles funcionales similares, no muestran identidad de secuencia y existen importantes diferencias estructurales entre ellas.  En el presente trabajo, se describe la expresión y purificación de las proteínas ribosomales de T. cruzi P0 y P2b, como así también el estudio inicial de sus características estructurales y de plegamiento mediante PAGE en gradiente transversal de urea, PAGE nativo y proteólisis limitada. TcP2b se expresó en forma soluble y no mostró indicios de poseer una estructura terciaria definida. TcP0, por otro lado, fue hallada exclusivamente como cuerpos de inclusión y durante los ensayos de replegamiento mostró gran tendencia a la agregación. Electroforesis nativa y en gradiente transversal de urea mostraron que la responsable de esta agregación es el estado plagado de TcP0 y no un estado intermedio en la vía de plegamiento. Esta información fue utilizada para el replegamieno de la proteína con un alto rendimiento.