Inmunoprecipitación de proteínas fosforiladas en residuos tirosina en feto de rata. Modulación por Angiotensina II

ALVAREZ S.E.; JURI AYUB M; CIUFFO G.M

Mendoza. Argentina.

Congreso; XXXIV REUNIÓN ANUAL SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACIÓN EN BIOQUÍMICA Y BIOLOGIA CELULAR; 1998

Actualmente se reconoce que los receptores de Angiotensima II (Ang II) cumplen roles importantes en procesos de crecimiento y diferenciación celular. En trabajos previos observamos que Ang II está acoplada a la defosforilación de proteínas en tirosina en feto de rata (E20), efecto mediado por ambos subtipos de receptores de Ang II (AT1 y AT2). Se realizaron estudios de inmunoprecipitación de proteínas fosforiladas en membranas de feto estimuladas con Ang II (1mM), a fin de caracterizar las proteínas involucradas. Para verificar la actividad de los receptores luego de la solubilización, se realizaron ensayos de binding en fracción solubilizada (CHAPS 1%). Estudios de competición muestran que el competidor específico para el subtipo AT1 prácticamente no desplaza el binding de [125I]Sar1 Ile8 Ang II, mientras competidores en receptores AT2, desplazan más del 90% del binding. Las afinidades relativas de Ang II, CGP421112 y PD123177 son ligeramente inferiores a las observadas en membranas de feto. Estudios de inmunoprecipitación con anticuerpos anti-fosfotirosina, permiten identificar bandas de proteínas de 60 y 80 kDa, moduladas por Ang II. Mediante Western blot se muestra que VO4-3 (1Mm) revierte el efecto inhibitorio de Ang II. Inhibidores de tirosina quinasas, como tyrphostina A23 tienen un efecto per se que no modifica la respuesta a Ang II. Estos resultados indican que probablemente el efecto de Ang II sobre la fosforilación de proteínas está mediado por una tirosina fosfatasa.