Caracterización de un antígeno de Trypanosoma cruzi rico en ácido glutámico

GHÍO S.; LEVITUS G.; JURI AYUB M.; GONZÁLEZ A; LEVIN MJ.

Colón. Entre Ríos. Argentina.

Congreso; XVII REUNIÓN DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE PROTOZOOLOGÍA; 1999

En el contexto del Proyecto Genoma Trypanosoma cruzi del CYTED se secuenció un marcador EST (expression sequence tag) de 718 pb, con el cual se realizaron sondas para rastrear una biblioteca genómica de cósmidos del Proyecto Genoma. El análisis por secuenciación de los clones obtenidos permitió identificar al gen correspondiente a este EST. El gen posee un marco de lectura abierto que codifica para una proteína de 1200 aa rica en residuos de ácido glutámico y aspártico que denominamos GARP (por glutamic acid rich protein). Esta proteína no presenta homología con las almacenadas hasta el momento en las bases de datos. Completada su caracterización genética, y debido a sus extensas regiones de aminoácidos ácidos, propusimos a GARP como una posible proteína antigénica en la infección chagásica. Para demostrarlo subclonamos el gen en el vector de expresión pMAL-c2. Con la proteína de fusión MBP-GARP purificada se realizaron ensayos de Western blot utilizando sueros de pacientes chagásicos. Como MBP-GARP fue reconocida por algunos sueros, se determinó por ELISA la reactividad de GARP para un número mayor de sueros. Se ensayaron 60 sueros de pacientes chagásicos, de los cuales un 20% reconoció a GARP. Con esta proteína de fusión también se inmunizaron ratones para obtener anticuerpos policlonales y así poder identificar la proteína nativa del parásito. Los antisueros obtenidos presentaron altos niveles de anticuerpos contra GARP y reconocieron por Western blot algunas bandas en un lisado de epimastigotes de T. cruzi, las cuales están siendo caracterizadas.