La hipoxia celular induce la sobreexpresión de estearoil CoA Desaturasa 1 (SCD-1) y cambios lipidómicos en CRCC

MELANA COLAVITA, JUAN PABLO; TODARO, JUAN SANTIAGO; BARNES, TAMARA; RODRÍGUEZ, JUAN PABLO; AGUIRRE, MARÍA VICTORIA

Jornada; XXV Comunicaciones Científicas y Tecnológicas - 2019; 2019

Un evento metabólico ubicuo en el cáncer es la activación constitutiva de la ruta biosintética de los ácidos grasos, que produce ácidos grasos saturados (SFA) y ácidos grasos monoinsaturados (MUFA) para sostener la creciente demanda de fosfolípidos que se utilizan en la construcción de nuevas membranas celulares de células en proliferación. En Cáncer, se ha estudiado extensamente la activación de enzimas que conducen a un aumento de la síntesis de SFA. Éstos últimos se convierten en MUFA por acción de la enzima estearoil-CoA desaturasa 1 (SCD-1). Se ha demostrado que SCD-1 podría ser un blanco terapéutico en oncología dado que la inhibición farmacológica de la misma induce apoptosis de células tumorales. Nosotros hemos observado previamente en carcinomas renales de células claras (CRCC), que la expresión de SCD-1 correlaciona con otros marcadores del microambiente tumoral típicos de hipoxia (EPO, EPO-R, VEGF, entre otros). Sin embargo, hasta el presente no se ha relacionado a la hipoxia, típica en los tumores sólidos, como responsable de la expresión de la enzima SCD-1 y la aparición de los cambios lipidómicos que la misma induce.El objetivo del presente trabajo fue demostrar que la hipoxia celular es la responsable de los cambios metabólicos que sufren las células de CRCC. Para lo cual se trabajo con las siguientes metodologías y materiales:- Cultivos Celulares de la línea celular Caki-2 (línea celular de CRCC).- Inducción del microambiente hipóxico con diferentes concentraciones de CoCl2 (Control, 100 uM, 200 uM, 300 uM y 400 uM) durante un lapso de 24 H. - La expresión del RNAm de la enzima SCD-1, se cuantificó mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR).- Estrategias lipidómicas mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (GS-MS).- Tinción celular de lípidos neutros provenientes de gotas lipídicas con BODIPY 493/503 y visualización por Microscopía Confocal.- CAY 10566: Inhibidor de la enzima SCD-1.Se demostró por qPCR, un notable aumento de la enzima SCD-1 en comparación a células no sometidas a hipoxia. Posteriormente se analizó por GC- MS la funcionalidad enzimática a través de la determinación de metabolitos lipídicos sustratos y productos de la enzima, observando un aumento de los ácidos grasos 16:0 y 18:0 en los controles, en comparación con aquellos tratamientos hipóxicos que muestran estos ácidos grasos disminuídos por sobreexpresión de la enzima. Al mismo tiempo mediante Microscopia Confocal y tinción con Bodipy se observo un aumento de lípidos neutros en gotas lipídicas intracitoplasmáticas, donde son almacenados los MUFAs como CE y TAG. Por el contrario, se evidenció que al inhibir la actividad enzimáticade SCD-1, se produce acumulación de SFA (principalmente 18:0) y el descenso de su respectivo MUFA (18:1).En conclusión, en el presente trabajo, aportamos evidencias acerca del rol de SCD-1 inducida por el microambiente hipóxico generado en células de carcinoma renal. En tales condiciones la misma se sobreexpresa y altera los niveles normales de ácidos grasos constituyentes de fosfolípidos o gotas lipídicas. Estos datos son compatibles con los resultados previamente mostrados por otros autores, que proponen a esta enzima como blanco terapéutico de acción para el tratamiento de los desbalances lipídicos y por ende de la regularización del descontrolado microambiente tumoral.