Evaluación del perfil lipídico y expresión de Estearoil CoA Desaturasa-1 en células de carcinoma renal

MELANA COLAVITA, JUAN PABLO; TODARO, JUAN; STOYANOFF, TANIA; BALSINDE, JESÚS; RODRÍGUEZ, JUAN PABLO; AGUIRRE, MARÍA VICTORIA

San Pablo

Congreso; Reunión de la Asociación de Universidades Grupo Montevideo (AUGM); 2016

IntroduçãoEl carcinoma de células renales (CCR) constituye el cáncer urológico más letal. El subtipo más frecuente lo constituye el Carcinoma Renal de Células Claras (CRCC). La denominación de ?células claras? se debe a la morfología histológica por la acumulación de glucógeno y lípidos a nivel citoplasmático, consecuencia de la alteración del metabolismo normal para suplir la mayor demanda energética por parte de las células tumorales.Los lípidos son almacenados en forma de enormes gotas lipídicas (lipid droplets: LD). Los compuestos lipídicos desempeñan un papel esencial en muchos procesos biológicos, incluyendo la formación de membranas plasmáticas, transducción de señales, entre otras. El conocimiento de los principales lípidos implicados en dichos procesos tumorales, permitirá establecer las enzimas sobre las cuales actuar para reducir su actividad y por consiguiente detener la proliferación celular maligna. Lo anteriormente mencionado pone en evidencia un posible blanco de acción terapéutica, como ser entre otras de las enzimas del metabolismo lipídico la Estearoil CoA Desaturasa-1 (SCD-1), responsable de la transformación de los ácidos grasos (FA) saturados (SFAs) en insaturados (MUFAs), los cuales juegan un rol fundamental en el desarrollo celular.ObjetivosAnalizar el contenido lipídico desde una perspectiva lipidómica y relacionarlo con la expresión de la enzima SCD-1 en tejido renal distal normal y tumoral a partir de pacientes diagnosticados con CRCC.Material e MétodosSe analizaron 12 especímenes de resección de CRCC, obtenidos a partir del servicio de Urología del Hospital J.R. Vidal, siguiendo las normas Bioéticas Nacionales. Se obtuvo de cada paciente una muestra tumoral y una normal distal renal. Cada muestra fue fragmentada para realizar diferentes ensayos. Los cultivos celulares primarios se desarrollaron durante un lapso de 10 días, para luego visualizar el contenido lipídico por tinción Oil Red. Se determinó la expresión del gen de la enzima SCD-1 por retrotranscripción y reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR), seguido por electroforesis en gel de agarosa.La expresión de la enzima se analizó por Western Blot.Para el análisis lipidómico, los lípidos totales fueron extraídos con el método de Bligh & Dyer. Posteriormente, las clases de lípidos se separaron usando Cromatografía en capa delgada (TLC), y los acidos grasos presentes en cada una de ellas se analizaron por cromatografía de gases acoplado a un espectrometro de masas (GC-MS).Resultados e DiscussãoLas células tumorales en cultivos de pacientes con CRCC exhiben gran cantidad de LD con respecto a las normales distales del mismo paciente. Asimismo, los resultados de RT-PCR y Western blot permiten observar la sobreexpresión del transcripto y de la proteína SCD-1 con respecto a las muestras controles, por lo que se infiere una mayor actividad lipogénica en procesos tumorales. Por otro lado, el análisis preliminar de la composición de los FA, reveló que en los casos de CRCC predominan elevadas concentraciones de ácido oleico y palmitoleico, componentes de gran importancia en la proliferación celular, derivados de la actividad de SCD-1 sobre los SFAs (esteárico y palmítico, respectivamente). Adicionalmente, se puede observar que en las porciones tumorales existe un elevado contenido de ácido araquidónico, precursor de metabolitos involucrados en diversas etapas del proceso inflamatorio y potencial segundo mensajero.ConclusõesLos datos precedentemente mostrados evidencian una notable diferencia en el contenido lipídico de las células de este tumor, presumiblemente debido a la acción incrementada de SCD-1 (entre otras), una de las enzimas implicadas, en el metabolismo lipídico descontrolado. Su elevada actividad aumenta consiguientemente las concentraciones intracelulares de ácido oleico, palmitoleico y araquidónico. La inhibición o regulación de esta enzima clave podría ser de potencial utilidad como blanco terapéutico para el tratamiento de esta enfermedad.