Optimización de cultivos primarios de células de carcinoma renal de células claras como modelo ?in vitro? para estudios metabólicos y determinantes de progresión neoplásica

RODRÍGUEZ, JUAN PABLO; MELANA COLAVITA, JUAN PABLO; STOYANOFF, TANIA; CORTÉS, MARÍA A.; ESPADA, JOAQUÍN; TODARO, JUAN; AGUIRRE, MARÍA VICTORIA

Corrientes

Jornada; 9na Jornadas de Investigaciones Científicas e Innovaciones Didácticas en Ciencias de la Salud; 2015

El carcinoma renal de células claras (CRCC) es el subtipo histológico más frecuente de tumores renales. Posee intensa vascularización y lipogénesis con alta resistencia a la quimio y radioterapia convencionales. La falta de modelos ?in vitro? que permitan predecir una respuesta terapéutica más efectiva impone su desarrollo a partir de tejidos tumorales humanos para un conocimiento más profundo de la biología tumoral. El objetivo del estudio fue optimizar la implementación de cultivos primarios a partir de muestras de pacientes con CCRC para comprobar la conservación del fenotipo lipogénico contra cortes fijados del mismo origen.Se utilizaron muestras de tejido tumoral de pacientes con CRCC, sometidos a nefrectomía radical del Hosp. ?J.R. Vidal?(Ctes) n=20. Secciones de 1 mm3 se disgregaron con diversas técnicas. Luego, 5x105 células/ml se cultivaron en DMEM F-12 (Sigma) con 10% suero fetal bovino, pencilina/estreptomicina (50 U/ml y 50 ug/ml), anfotericina B (2,5 ug/ml), glutamina y transferrina (5 ug/ml) en placas recubiertas que se incubaron con 5% CO2 a 37°C. Se evaluó adherencia, fenotipo lipogénico (Red Oil), potencial de clonación (N° de subcultivos), proliferación (MTT) y capacidad de migración (scratch de monocapa) bajo diferentes condiciones experimentales. El mayor rendimiento y viabilidad se verificó con digestión de colagenasa (1mg/ml; pH:7,6; 1 h a 37°C). La adherencia se logró a las 24 hs de incubación con colágeno comercial y gelatina 0,2% en 60% de los casos. Se obtuvieron monocapas en un 40% tras 5 ± 1 días de incubación con potencial de migración. El promedio de subcultivos fue de 3 ± 1. Este estudio permitió estandarizar cultivos primarios de CCRC comprobándose la conservación de la fenotipia lipogénica, logrando así una herramienta útil para el estudio de la biología tumoral y el ensayo de nuevas terapéuticas.